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本研究用猪流感病毒H1N1亚型对9-11日龄鸡胚进行尿囊腔接种，剂量为100μl/枚，培养72小时后收集鸡胚尿囊液，HA试验检测其HA血凝效价为2~8。用4%的甲醛对新培养的H1N1亚型病毒进行灭活，然后免疫6-8周龄的BALB/C，每只小鼠免疫灭活H1N1亚型流感病毒150μl/只，以后每隔14d加强免疫一次，在二次免疫后10d取尾静脉血，利用HI试验检测其HI抗体效价为2~6，取免疫小鼠脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。建立筛选阳性克隆细胞的间接酶联免疫吸附试验（iELISA）筛选方法，确定包被抗原的最佳稀释倍数为1:100，4℃包被过夜，以1:800稀释阴阳性血清作为阴阳性对照，反应条件为37℃1.5h效果最佳，酶标二抗1:3000稀释最佳反应时间为1h。用所建立的iELISA筛选方法对融合的杂交瘤细胞进行筛选，结果共获得阳性杂交瘤细胞24株。利用有限稀释法对阳性细胞株进行亚克隆，（每株单抗至少有两次为单个克隆）后，用iELISA进一步检测筛选，最终获得9株能稳定分泌抗H1N1亚型抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为A10、D1、D3、E2、E4、H1、H8、G5、G7。对这9株单克隆抗体用iELISA分别进行了腹水效价、特异性、抗体亚型进行了检测，结果如下：A10、D1、H8的抗体效价为51200，D3、G5为3200，E2、H1、G7的抗体效价为12800，E4的抗体效价为25600;特异性良好，其中A10、D3、E2、E4、H1、H8、G5、G7均与血凝素H1呈阳性反应，D1与神经氨酸酶N1呈阳性反应。与其它HA亚型流感病毒、NA亚型流感病毒以及非流感病毒均不反应；经亚型鉴定，A10、H1为IgG2a，G7为IgM, D1、D3、E2、E4、H8、G5均为IgG1；用吉姆萨染液染色对克隆细胞株进行染色体计数，结果染色体他数目均介于100-110之间，具有杂交瘤细胞典型的染色体特征。为制作胶体金检测试纸条选择配对抗体，对所获得的克隆株进行了抗原位点检测，经抗原位点检测显示D3与G5，E4与H8对应病毒的相同抗原位点，其他单克隆抗体均对应不同的抗原位点，其中A10与D1的叠加系数（AI）值为90.5%，配对关系良好，所以选择用A10与D1制备检测H1N1亚型流感病毒的胶体金试纸条。用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒，通过对于A10株单抗腹水的稀释确定了胶体金的最低稳定量，成功制备了金标抗体，经过不断摸索确定了NC膜的最佳包被单抗为D1,包被浓度为1:2稀释，羊抗鼠的酶标二抗的包被浓度为1:20稀释。分别选择CB06、KL43制备胶体金试纸条的样品垫和金标垫。对所研制的试纸条进行了特异性、敏感性检测，结果如下：本试纸条除与H1N1亚型特异性反应外，不与其他亚型的HA和NA起反应；本试纸条检测血凝效价为（0.5log2）灵敏度高于HA试验，但是低于RT-RCR试验（0.25log2）。用本试纸条与RT-RCR同时对98份样品进行检测，结果二者的符合率高达81.6%。结果表明本试验制备的试纸条特异、敏感，可用于H1N1猪流感病毒的快速诊断。