人降钙素原(PCT)是上世纪九十年代发现的细菌、真菌性感染的特异性标志物,在严重全身性细菌、真菌、寄生虫、急性疟疾感染、系统性反应综合症(SIRS)、多器官功能衰竭综合症(MODS)的诊断方面,PCT是一个具有高灵敏度、特异性的新指标。降钙素原是人降钙素的前体物质,由116个氨基酸组成,相对分子量13KD。PCT是甲状腺滤泡旁C细胞产生和分泌,并由细胞内特殊蛋白酶分解为有活性的降钙素。本文通过实验研究建立了人降钙素原双抗体夹心法ELISA检测体系。首先,本研究通过将人降钙素原N-端多肽标准品免疫新西兰大耳白兔获得抗体血清,使用免疫亲和层析法纯化获得多克隆抗体。多克隆抗体效价为128000。经验证与其它类似蛋白及本论文中涉及到的蛋白没有交叉反应。本研究选择人降钙素原C-端多肽标准品作为抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及细胞克隆制备了具有高效价和高特异性的腹水。并成功地制备了成功筛选出三株分泌抗体效价高的细胞,分别为3H5、2D7和3C9。选择效价最高的3C9大量制备小鼠腹水,经纯化获得了具有高特异性的PCT单克隆抗体。进一步采用过碘酸钠法将多克隆抗体与辣根过氧化物酶连接制得酶标抗体,通过对ELISA各种条件进行优化,包被量为350 ng/well,包被液为0.1 mol/L PBS,包被条件为4℃过夜,酶标抗体为1:4000稀释,建立了人降钙素原双抗体夹心ELISA检测体系。双抗体夹心ELISA方法灵敏度为0.05 ng/mL,板内和板间变异系数均低于 10%。论文通过对所建立的ELISA检测体系进行了初步验证,检测结果表明:敏感性93.2%,特异性97.9%。然后与法国梅里埃VIDAS PCT试剂盒进行对比实验,结果表明两种方法具有良好的相关性。本论文进一步对包被酶标板,标准品和酶标抗体的稳定性进行了研究,试剂盒可在4℃条件下放置6个月以上保持检测性能基本不变,为进一步开发并研制快速检测人降钙素原试剂盒奠定了基础。