【摘 要】
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本文主要研究从海水小球藻中分离提取多糖,采用的是超声辅助热水浸提的方式,并对提取条件进行优化,优化的最佳条件下提取海水小球藻多糖,对提取的海水小球藻多糖进行层析柱法分离纯化,进行了抗氧化试验,并研究海水小球藻纯多糖对日本蟳部分免疫酶活性的影响。实验研究结果如下:（1）将海水小球藻经活化后扩大培养后,将处于稳定期的海水小球藻进行收集,对收集的海水小球藻泥进行真空冷冻干燥,制得海水小球藻粉。利用0.1
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本文主要研究从海水小球藻中分离提取多糖,采用的是超声辅助热水浸提的方式,并对提取条件进行优化,优化的最佳条件下提取海水小球藻多糖,对提取的海水小球藻多糖进行层析柱法分离纯化,进行了抗氧化试验,并研究海水小球藻纯多糖对日本蟳部分免疫酶活性的影响。实验研究结果如下:（1）将海水小球藻经活化后扩大培养后,将处于稳定期的海水小球藻进行收集,对收集的海水小球藻泥进行真空冷冻干燥,制得海水小球藻粉。利用0.1%活性炭进行脱色,5%的三氯乙酸（trichloroaceticacid,TCA）除蛋白。（2）以海水小球藻的多糖提取率为主要指标,分别对海水小球藻的超声破碎时间、提取温度、浸提时间进行单因素试验。发现超声破碎时间在40 min时,多糖提取率最高,达到3.52%,说明超声波有利于海水小球藻的多糖溶出,超声破碎时间过久使得小球藻多糖内部结构破坏,导致多糖提取率下降;当温度到达90℃时,多糖提取率最高值为4.23%,之后出现下降的趋势,可能的原因是多糖在过高温环境,糖链断裂,多糖变性,提取率略有降低;浸提时间在2 h时,提取率最高为4.1%,浸提时间过短使得小球藻多糖没有完全溶出,浸提时间过长可能使小球藻多糖发生降解,多糖提取率不高。（3）经过响应面优化分析,海水小球藻多糖的提取的影响程度依次为:提取温度＞超声破碎时间＞浸提时间。通过实际调整得出最佳的超声辅助热水浸提法的提取海水小球藻多糖的提取条件为:超声破碎时间41 min,提取温度85℃,浸提时间2 h,最终得到的海水小球藻多糖提取率5.40%,与预测多糖的提取率5.46%较为相近,说明响应面法优化海水小球藻多糖的提取条件是可靠的。（4）利用DEAE-52纤维素层析柱对海水小球藻粗多糖进行分离初化,最后洗脱出酸性多糖组分CPP-2。在200-500 nm波长下对海水小球藻多糖CPP-2进行紫外光谱扫描,检验出该多糖组分中不含有核酸和蛋白质成分,纯度较高。（5）当浓度为1 mg/m L时,海水小球藻多糖CPP-2清除DPPH自由基的能力为87.32%,约占同等浓度下VC清除率的89.42%,充分说明其对DPPH自由基有很好的清除效果;CPP-2对羟基自由基清除率稳定在60.57%,约占同等浓度下VC清除率的73.19%,清除羟基自由基的效果较好;浓度同为1 mg/m L时,CPP-2对超氧阴离子自由基的清除率只占VC的40.98%,清除效果还原力约为VC的还原力的34.17%,说明海水小球藻纯多糖CPP-2具有一定程度的清除超氧离子的能力和还原力。（6）对于试验组而言,注射后24 h日本蟳血清中超氧化物歧化酶活性达到最高,比对照组高出21.34%,在5、24、48 h时试验组与对照组相比皆有显著性差异;注射后72 h过氧化氢酶活性达到最大值,比对照组高出40.19%,在24、48、72 h时试验组与对照组相比皆有显著性差异;注射后48 h溶菌酶酶活性达到最高,比对照组高出77.47%,在5、24、48 h时试验组与对照组相比皆有显著性差异;注射后48 h酸性磷酸酶的酶活性达到最高值,是对照组的2.27倍,在5、24、48 h时试验组与对照组相比皆有显著性差异;注射后48 h碱性磷酸酶的酶活性达到最高值,酶活力比对照组高出34.09%,在24、48 h时试验组与对照组相比皆有显著性差异。说明了海水小球藻多糖CPP-2对对日本蟳具有较强烈诱导免疫应答作用。该论文有图19幅,表17个,参考文献103篇。
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