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氟(Fluorine)是一种非金属元素,也是人体必需的一种微量元素。氟具有强大的电负性,以氟化物(Fluoride)的形式广泛存在于自然界中。摄入适量的氟有利于机体预防龋齿、维持钙磷代谢和保持神经冲动传导,而过量的氟化物则对机体产生强烈的毒性作用,能引起机体多系统损害。过去,人们多以氟对骨相组织的损害为研究重点,但近年来,随着氟化物在工农业生产和生活中的广泛应用,氟对机体生殖系统等非骨相组织的毒性作用逐渐被人们所重视。随着研究的深入,人们发现高氟区男性不育率显著高于非高氟区,精子数量和质量明显降低。因此,关于氟致雄性生殖毒性的研究日益受到关注。 生精细胞凋亡可发生于正常生精过程中。在正常生精过程中,由于生殖细胞的减少而丢失的精子数,占精子生成总量理论值的25%~75%。生精过程中,生精细胞凋亡在生殖细胞成熟的特殊阶段被触发以维持细胞数目的平衡,并发生于生精过程的始终。在睾丸生精过程中,曲细精管内大量生殖细胞发生的凋亡对睾丸正常生理调节及某些疾病的发生具有重要意义。但关于氟能否导致生精细胞凋亡以及生精细胞凋亡在氟致雄性生殖损害中的意义的研究,国内外报道却较少。因此,研究氟对生精细胞凋亡的影响可为深入探讨氟的生殖毒性和筛选氟暴露者早期生殖健康监护指标提供科学依据。 材料和方法 1.剂量分组:选用4~5周龄雄性Wistar大鼠30只,体重110~130g,随机分为6组,即:对照染毒28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照染毒38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。每组5只动物。对照组、郑州大学医学院2004硕士学位论文氟致大鼠生精细胞凋亡及其机制的实验研究 低剂量组和高剂量组氟化钠的染毒剂量分别为:o、10、Zom叭gBW/Zd。 2.染毒方法及检测指标:按上述染毒剂量和染毒时间,各染氟组分别隔日 腹腔注射NaF溶液,对照组隔日腹腔注射生理盐水,制作染氟动物模型。各组 染毒结束后称重并处死动物,解剖取翠丸、附攀,称重并分别计算脏器系数;采 用氟离子选择电极法测定翠丸组织中氟含量;放免分析方法测定血清翠丸酮(T) 和雌二醇(EZ);观察翠丸的组织病理学变化;采用TdT介导的末端标记法检测 凋亡的生精细胞。 3.各项指标的统计学处理:选用单因素方差分析、独立样本t检验和直线相关分析,以a=0.05为显著性检验水准。结果 1.大鼠体重、翠丸和附皋重量及其脏器系数分析结果:高剂量染毒28d组与同期对照组比较,除右侧翠丸重量和右侧附翠脏器系数外,其他3项指标差异均有统计学意义(尸<0.05或尸<0.01);高剂量染毒28d组与同期低剂量染毒组比较,右侧翠丸脏器系数降低,差异有统计学意义(P<0 .05);低剂量染毒28d组与同期对照组比较,除右侧翠丸重量和右侧附攀脏器系数外,其他3项指标差异均有统计学意义(尸<0.05);低剂量染毒38d组、高剂量染毒38d组分别与同期对照组比较,大鼠体重、攀丸重量和附翠重量降低,差异均有统计学意义(P<0.05或p<0.01);高剂量染毒38d组与高剂量染毒28d组比较,除右侧翠丸脏器系数外,其他4项指标差异均有统计学意义(尸<0.05或尸<0 .01):低剂量染毒38d组与低剂量染毒28d组比较,右侧翠丸重量降低,差异有统计学意义(尸<0.05)。说明动物体重、翠丸和附翠重量及其脏器系数与染氟剂量和染氟时间有关。 2.大鼠血清翠酮和雌二醇测定结果:染氟各组大鼠血清翠酮和雌二醇含量分别低于同期对照组,差异有显著性(P<0 .05或尸<0.01)。各染氟大鼠血清翠酮和雌二醇含量随染氟剂量的增加和染氟时间的延长而逐渐降低(尸<0.05或尸<0 .01)。结果提示,一定剂量的氟化钠能干扰血清翠酮和雌二醇活性,引起雄性大鼠生殖内分泌功能紊乱。 3.大鼠翠丸组织氟含量测定结果:染氟组分别与同期对照组比较翠丸氟含量均升高,差异有统计学意义(尸<0.01);高剂量染氟组分别与同期低剂量染氟组比较,攀丸氟含量亦显著性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结果提示,郑州大学医学院2004硕士学位论文氟致大鼠生精细胞凋亡及其机制的实验研究接触一定量的氟化钠能增加翠丸组织氟负荷水平。 4.大鼠翠丸组织病理学检测结果:染氟各组卜可观察到肇丸生精上皮细胞层次减少,成熟精子数量减少,组织结构变得疏松。且随染氟剂量的加大、时间的延长,氟性损害逐渐加重。提示,一定剂量的氟化钠能损害肇丸的组织结构。 5.大鼠生精细胞凋亡检测结果:染氟各组大鼠总生精细胞凋亡率、精原细胞凋亡率、精母细胞凋亡率以及精子细胞和精子凋亡率分别高于同期对照组,差异有显著性(尸<0.01)。各染氟大鼠生精细胞凋亡率随染氟剂量的增加和时间的延长而逐渐升高(尸<0.01)。结果提示,一定剂量的氟化钠能引起生精细胞凋亡率的升高。 6.各染氟组大鼠生精细胞凋亡率与肇丸氟含量的关系:各染氟组大鼠总生精细胞凋亡率与翠丸氟含量均呈正相关(低剂量染毒28d组;=0.878,尸<0 .05;高剂量染毒28d组;=0.931,P<0.05;低剂量染毒38d组;=0.900,尸<0.05;高剂量染毒38d组;=0.988,尸<0.01)。各染氟组大鼠精原细胞凋亡率与攀丸氟含量