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胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率、死亡率居高不下。胃癌常因早期症状不明显被患者忽视,当出现明显症状就诊时往往已处于中晚期,给胃癌的临床治疗增加难度。胃癌的发生发展是一个涉及多种调控机制的复杂过程,与细胞增殖和细胞凋亡密切相关。细胞增殖过多和细胞凋亡减少会导致癌细胞生长失控,最终导致肿瘤的发生与发展。胃腺癌是胃癌最常见的病理类型,对胃癌的研究主要围绕胃腺癌展开。白介素-34（Interleukin 34,IL-34）是白介素家族的重要促炎细胞因子,不仅与动脉粥样硬化、类风湿关节炎、肝纤维化等慢性炎症疾病密切相关,且与肿瘤的发生、发展联系密切。在胃腺癌中只有周红菊等人研究过IL-34在患者血清中呈高表达,而IL-34在胃腺癌组织和细胞株中的表达以及对细胞增殖和细胞凋亡的影响尚属未知,作用机制也还未明确。因此本研究采用免疫组化SP法、Western blot、RT-q PCR检测IL-34在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达;并采用TDT-介导的d UTP缺口末端标记技术（TUNEL法）检测胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中细胞凋亡情况。采用Western blot检测IL-34在人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823、AGS中的蛋白表达,选取蛋白表达量最高的MGC-803和AGS细胞进行后续细胞实验。采用Western blot和RT-q PCR实验验证si-IL-34在胃腺癌细胞中的转染效率;CCK8、平板集落形成实验和流式细胞术检测IL-34对胃腺癌细胞增殖的影响;Hoechst33342染色、TUNEL染色以及流式细胞术检测IL-34对胃腺癌细胞凋亡的影响;Western blot检测胃腺癌细胞中IL-34对细胞周期蛋白、细胞凋亡蛋白及PI3K/AKT/NF-κB信号通路关键蛋白的调控。目的:研究IL-34在胃腺癌组织中的表达情况及其与胃腺癌组织中细胞凋亡的关系并探讨IL-34在胃腺癌细胞株中的表达,阐明IL-34可能通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路影响胃腺癌细胞增殖和凋亡,为胃腺癌的临床诊断及分子靶向治疗提供新思路。方法:组织水平:收集经手术切除的人胃腺癌组织标本60例,癌旁正常胃黏膜组织标本50例,采取免疫组化SP法测定IL-34的蛋白表达情况;选择TUNEL法检测60例胃腺癌组织和50例癌旁正常胃黏膜组织中的细胞凋亡情况,并分析胃腺癌中IL-34蛋白表达与胃腺癌细胞凋亡的关系。另外收集10例新鲜胃腺癌组织标本和10例配对的癌旁正常胃黏膜组织标本,采用Western blot检测IL-34的蛋白表达;采用RT-q PCR检测IL-34的m RNA表达。细胞水平:采用Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823和AGS中IL-34的蛋白表达,选择蛋白表达量最高的两株细胞MGC-803和AGS进行后续实验。化学合成靶向IL-34的2条si RNA序列（si-IL-34-1、si-IL-34-2）作为两个实验组,一段阴性核苷酸序列（si-NC）作为对照组,将三组分别转染胃腺癌MGC-803和AGS细胞:Western blot和RT-q PCR实验验证si-IL-34在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中的转染效率;CCK8和平板集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;Hoechst33342染色、TUNEL染色以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9以及PI3K/AKT/NF-κB信号通路关键蛋白p110α、p85α、p-AKT、AKT、p-NF-κB p65和NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:1组织水平实验结果:1.1免疫组化SP实验结果:IL-34蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织（P＜0.05）;并且同胃腺癌的组织分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关（P＜0.05）,同性别、年龄无关（P＞0.05）。1.2 TUNEL实验显示:同癌旁正常胃黏膜组对比,胃腺癌组细胞凋亡指数（AI）明显降低（P＜0.05）;AI表达率同胃腺癌的组织分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（P＜0.05）,同性别、年龄无关（P＞0.05）;1.3分析IL-34蛋白表达与AI表达的关系:胃腺癌中IL-34阳性表达组AI低于IL-34阴性表达组AI,差异有统计学意义（P＜0.05）;相关性分析显示,在胃腺癌中IL-34的蛋白表达与AI的表达呈负相关关系rs=-0.31（P＜0.05）。1.4 Western blot实验显示:IL-34在胃腺癌组织中的蛋白相对表达量高于癌旁正常胃黏膜组织（P＜0.05）。1.5 RT-q PCR结果显示:IL-34在胃腺癌组织中的m RNA表达高于癌旁正常胃黏膜组织（P＜0.05）。2细胞水平实验结果:2.1 Western blot检测发现:4株胃腺癌细胞株中IL-34的蛋白表达水平均高于正常胃黏膜细胞株,其中在MGC-803和AGS细胞中IL-34的蛋白表达量最高（P＜0.05）。2.2 RT-q PCR和Western blot结果显示:在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中,与si-NC组相比,si-IL-34-1、si-IL-34-2组中IL-34的m RNA及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。2.3 CCK8、平板集落形成实验和流式细胞术结果显示:在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中,与si-NC组相比,si-IL-34-1、si-IL-34-2组中细胞增殖能力减弱,细胞周期G1期显著延长（P＜0.05）。2.4 Hoechst33342染色、TUNEL染色和流式细胞术结果显示:在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中,与si-NC组相比,si-IL-34-1、si-IL-34-2组细胞凋亡增多（P＜0.05）。2.5 Western blot结果显示:在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中,与si-NC组相比,si-IL-34-1、si-IL-34-2组Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、p110α、p85α、p-AKT、p-NF-κB p65蛋白表达均下调（P＜0.05）;Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的蛋白表达升高（P＜0.05）;而AKT、NF-κB p65总蛋白表达无明显改变（P＞0.05）。结论:1 IL-34在胃腺癌中高表达,并与癌细胞凋亡呈负相关。2 IL-34促进胃腺癌细胞的增殖、抑制胃腺癌细胞凋亡。3 IL-34可能通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路影响胃腺癌细胞的增殖和凋亡。