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目的:以小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为模型,研究自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控作用机制,为锰中毒职业人群的防治提供理论与实验依据。方法:1.TM3细胞分别暴露于MnCl2 0μM（空白对照组,C）、100μM（低剂量组,L）、200μM（中剂量组,M）、300μM（高剂量组,H）24 h。观察细胞形态,MTT比色法测定细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞内ROS（Reactive Oxygen Species）水平,TBA法检测细胞内丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,WST-8法检测总超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性,总谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GPx）检测试剂盒测定总GPx活性,流式细胞仪检测Annexin V/PI双染后细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞内自噬,Western blot检测自噬相关蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。2.TM3细胞在自噬激动剂雷帕霉素（Rapamycin,RAP,0.1μM）预处理2h后暴露300μM锰（RH组）24 h、细胞在自噬抑制剂siRNA-Beclin-1（40 nM）预处理5h并继续培养24h后暴露300μM锰（BH组）24 h。然后观察细胞形态,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-8法检测总SOD活性,总GPx检测试剂盒测定总GPx活性,Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测自噬相关蛋白p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。3.TM3细胞在Nrf2信号通路激动剂叔丁基对苯二酚（Tert-butylhydroquinone,TBHQ,10μM）预处理2 h后暴露300μM锰（TH组）24 h、TM3细胞在Nrf2信号通路抑制剂siRNA-Nrf2（40 nM）预处理5h并继续培养24 h后暴露300μM锰（NH组）24 h,然后观察细胞形态,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-8法检测总SOD活性,总GPx检测试剂盒测定总GPx活性,Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测Nrf2信号通路相关蛋白HO-1、NQO-1、自噬相关蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。结果:1.与C组比较,锰以剂量依赖方式诱导TM3细胞活性下降及形态改变;M、H组与C组比较,ROS、MDA含量逐渐增加（P<0.05）而总SOD、总GPx活性逐渐下降（P<0.05）,凋亡率逐渐升高（P<0.05）,促凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax表达水平随锰浓度增加而升高（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则逐渐降低（P<0.05）;随着锰浓度增加,自噬溶酶体数量逐渐增多,M、H组p-Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/Ⅰ比例增加（P<0.05）,而p62蛋白表达水平较空白对照组呈先增加后降低趋势;与C组比较,Nrf2及其下游效应蛋白HO-1、NQO-1的表达在锰暴露后均呈先增加后降低趋势,而HO-1蛋白表达水平虽呈先增加后降低趋势,且各剂量锰暴露组的HO-1蛋白表达水平均比C组高（P<0.05）。2.与H组比较,RH组ROS含量呈减少趋势（P>0.05）,总SOD活力增加（P<0.05）;而BH组ROS、MDA含量均较H组呈增加趋势（P>0.05）,总SOD、总GPx活力较H组呈降低趋势（P>0.05）。与H组比较,RH组细胞凋亡率降低及Active caspase-3、Bax蛋白水平减少;而BH组Bax蛋白水平增加（P>0.05）,细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达较H组、RH组明显增加（P<0.05）。与H组比较,RH组HO-1蛋白表达水平升高,而BH组HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;Nrf2蛋白的表达在各实验组间无统计学意义（P>0.05）。3.与H组比较,TH组ROS含量明显降低（P<0.05）,总SOD活力明显增加（P<0.05）;NH组ROS、MDA含量较H组明显增加（P<0.05）,而总SOD、总GPx活力下降。流式细胞术检测细胞凋亡率发现,与H组比较,TH组细胞凋亡率降低,而NH组凋亡率较H组明显增加（P<0.05）。与H组比较,TH组Active caspase-3表达水平减少,Bcl-2表达水平明显增加（P<0.05）,而NH组Active caspase-3表达水平增加,Bcl-2表达水平虽增加,但差异无统计学意义（P>0.05）。与H组比较,TH组LC3Ⅱ/Ⅰ的比例减少（P>0.05）,p-Beclin1、p62蛋白表达水平增加（P>0.05）;而与H组比较,NH组p-Beclin1、p62蛋白表达水平均显著减少（P<0.05）。结论:1)锰致TM3细胞氧化损伤中激活自噬和Nrf2信号通路;2)在一定剂量下自噬在锰致TM3细胞氧化损伤中起保护作用;3)Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中起保护作用;4)自噬和Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中存在相互调控作用。