【摘 要】
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目的:探讨CD147抑制剂SP-8356对小鼠心肌细胞HL-1缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:（1）HL-1细胞处理与分组:培养小鼠心肌细胞HL-1,建立心肌细胞缺血再灌注损伤模型;分别分为空白组（Control组）、缺血再灌注组（IR组）、SP-8356预处理组（SP+IR组）、Nic预处理组（Nic+IR组）四组。（2）各组检测指标和方法:采用qRT-PCR检测HL-1细胞中CD147和
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目的:探讨CD147抑制剂SP-8356对小鼠心肌细胞HL-1缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:（1）HL-1细胞处理与分组:培养小鼠心肌细胞HL-1,建立心肌细胞缺血再灌注损伤模型;分别分为空白组（Control组）、缺血再灌注组（IR组）、SP-8356预处理组（SP+IR组）、Nic预处理组（Nic+IR组）四组。（2）各组检测指标和方法:采用qRT-PCR检测HL-1细胞中CD147和MMP-9的mRNA表达;Western blotting检测HL-1细胞中CyPA、CD147、MMP-9和NOS的蛋白表达;免疫荧光双染法观察CyPA和CD147的共表达情况;MTT检测HL-1细胞活性,流式细胞术检测HL-1细胞的凋亡情况;硝酸还原酶法检测NOS的活性。（3）统计方法:单因素方差分析做多组间比较,t检验做两组间比较,P?0.05表示差异有统计学意义。结果:（1）qRT-PCR结果:IR组中CD147的mRNA表达水平较Control组显著升高（P＜0.001）,SP+IR组、Nic+IR组中CD147的mRNA表达水平与IR组相比则显著下降（P＜0.01）。（2）WB结果:IR组中CyPA、CD147和MMP-9的蛋白表达水平较Control组显著升高,NOS的蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）;SP+IR组、Nic+IR组中CyPA、CD147和MMP-9的蛋白表达水平与IR组相比则显著下降,NOS的蛋白表达水平升高（P＜0.05）;同时CD147敲除后MMP-9表达降低（P＜0.01）。（3）免疫荧光双染法结果:IR组中CyPA、CD147与Control组相比具有较强的共表达活性;SP+IR组、Nic+IR组中CyPA和CD147也具有共表达活性,但与IR组相比共表达活性降低。（4）MTT结果:IR组HL-1细胞活性较Control组显著减弱（P＜0.01）;SP+IR组、Nic+IR组HL-1细胞活性较IR组显著增加（P＜0.05）。（5）流式细胞术结果:IR组HL-1细胞凋亡率较Control组显著升高（P＜0.01）;SP+IR组、Nic+IR组HL-1细胞凋亡率较IR组显著降低（P＜0.05）。（6）硝酸还原酶法结果:IR组中NOS的活力较Control组显著下降（P＜0.01）;SP+IR组、Nic+IR组中NOS的活力较IR组上升（P＜0.05）。（7）在用rAAV-NOS转染HL-1细胞后,与rAAV-empty组相比,CD147和MMP-9的表达都显著降低（P＜0.05）;用rAAV-NOS+si-CD147转染HL-1细胞后,与rAAV-NOS+NC-si组相比,MMP-9表达更进一步下降（P＜0.05）。结论:（1）小鼠心肌细胞HL-1缺血再灌注过程中CD147、CyPA和MMP-9表达增加。（2）CD147抑制剂SP-8356和尼可地尔降低小鼠心肌细胞HL-1缺血再灌注过程中CD147、CyPA和MMP-9表达。（3）SP-8356可能通过影响CD147-CyPA结合、MMP-9以及NOS活性改善小鼠心肌细胞HL-1缺血再灌注损伤。
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