【摘 要】
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为了阐明捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性产生的分子机制,并对耐药相关基因进行功能验证。本研究在捻转血矛线虫阿苯达唑敏感虫株和耐药虫株转录组测序数据比较分析的基础上,筛选了捻转血矛线虫Dauer期生长发育必需的四条信号通路中虫体耐药相关基因,并对筛选出的显著差异基因进行了生物信息学分析;通过RNAi对捻转血矛线虫x L3显著差异基因及耐药相关基因GST、P450和ABC进行了基因沉默,并对干扰后表达量显著
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为了阐明捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性产生的分子机制,并对耐药相关基因进行功能验证。本研究在捻转血矛线虫阿苯达唑敏感虫株和耐药虫株转录组测序数据比较分析的基础上,筛选了捻转血矛线虫Dauer期生长发育必需的四条信号通路中虫体耐药相关基因,并对筛选出的显著差异基因进行了生物信息学分析;通过RNAi对捻转血矛线虫x L3显著差异基因及耐药相关基因GST、P450和ABC进行了基因沉默,并对干扰后表达量显著降低的耐药相关基因沉默持续时间进行了试验;对RNAi后x L3表达量显著降低的耐药相关基因,进行了捻转血矛线虫虫卵RNAi试验,并对虫卵干扰温度进行了优化,对干扰后的虫卵利用虫卵孵化试验对其耐药相关性进行了试验验证。研究结果如下:（1）捻转血矛线虫Dauer信号传导通路中,c GMP信号通路共有101个差异基因,选择显著差异基因GCY-12作为耐药候选基因用于后续研究;ILS信号通路共有2个差异基因,该通路无显著差异基因;TGF-β信号通路共有32个差异基因,选择显著差异基因RSKS-1作为耐药候选基因用于后续研究;激素样信号通路共有22个差异基因,选择显著差异基因UGT2B31作为耐药候选基因用于后续研究。（2）捻转血矛线虫xL3 RNAi后,P450、RSKS-1和UGT2B31表达量未发生显著变化;ABC表达量显著升高;GST表达量下降了46%,GCY-12表达量下降了61.5%,GST和GCY-12干扰沉默时间分别为9d和11d,可用于后续耐药性研究。（3）捻转血矛线虫虫卵RNAi最佳温度为12℃,虫卵GST干扰后虫卵孵化试验处理组比空白对照组EC50降低70.22%,虫卵GCY-12干扰后虫卵孵化试验处理组比空白对照组EC50降低70.86%,敏感性增加。
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