牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type3 BPIV3）在世界范围内分布,是引起犊牛和成年牛呼吸道疾病综合征（Bovine Respiratory Disease Complex BRDC）的主要病原之一。近年来,BPIV3在我国广泛流行,急需开展相关研究以有效防控BPIV3的感染。目前我国对BPIV3的研究相对较少。本研究从呼和浩特周边某养牛场患呼吸道疾病的牛鼻拭子中分离到一株BPIV3毒株,命名为80035株。设计NP基因特异性引物,以BPIV3 80035基因组为模板PCR扩增NP序列构建原核表达载体,通过大肠杆菌原核表达系统和Ni亲和层析的方法制备重组NP,并利用Western blot方法验证其反应原性。将新西兰白兔分为四组,分别为灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组以及对照组,其中灭活疫苗通过BPIV3 80035以终浓度为0.3%的甲醛溶液灭活制备。分别于免疫前,免疫后每7d采血,利用间接ELISA和病毒中和试验比较四组新西兰白兔免疫后的特异性抗体和中和抗体水平。结果表明,成功分离到一株BPIV3,成功诱导重组NP以包涵体形式表达,且纯度浓度较高。Western blot结果表明,重组NP具有较强的反应原性;ELISA结果表明,在免疫后28天,对照组的特异性抗体效价均为0,灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组的特异性抗体效价分别为211、217和218。病毒中和试验结果表明,在免疫后28天,对照组的中和抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组的特异性抗体效价分别为23.32、24.48和24.98。综上,重组NP可以增强BPIV3灭活疫苗的免疫效果,可作为今后BPIV3灭活疫苗的新型接种方式,为BPIV3的有效防控奠定基础。