【摘 要】
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CD300家族分子是免疫细胞表面受体和免疫球蛋白超家族中的一类,在免疫应答中发挥重要的作用。为了探究抑制性受体CD300a在牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV）免疫调控机制中的作用,本试验分离了1株IBRV,使用定量PCR检测IBRV在永生化单核巨噬细胞中的生长规律;建立牛源CD300a、IL-1β、IL-6、IL-8、I
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CD300家族分子是免疫细胞表面受体和免疫球蛋白超家族中的一类,在免疫应答中发挥重要的作用。为了探究抑制性受体CD300a在牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV）免疫调控机制中的作用,本试验分离了1株IBRV,使用定量PCR检测IBRV在永生化单核巨噬细胞中的生长规律;建立牛源CD300a、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的荧光定量方法,检测IBRV感染巨噬细胞后0、6、12、24、48、72、96、120 h等不同时间点CD300a及各类细胞因子的转录变化;检测过表达和沉默CD300a后对IBRV复制及各类细胞因子转录变化的影响。结果显示:（1）IBRV在MDBK细胞上出现典型细胞病变,TCID50为10-5.23/μL,IBRV在牛单核巨噬细胞0～24 h迅速增殖,24 h后增殖变缓,48 h进入平台期,之后停止复制;（2）本研究建立的CD300a和炎性细胞因子荧光定量检测方法,标准曲线相关系数均大于0.998,扩增效率均大于92.2%;（3）IBRV感染巨噬细胞后CD300a表达量在8个时间段均高于对照组,IL-1β、IL-8相对表达降低,IL-6、IL-10、TNF-α相对表达增高;（4）通过慢病毒载体成功将CD300a基因过表达和沉默,结果显示过表达CD300a正调控IBRV DNA的复制及IL-1β、IL-10的转录,沉默CD300a正调控IL-6、IL-8、TNF-α的转录。本实验探究了CD300a在IBRV感染单核巨噬细胞后对炎性细胞因子的调控作用和病毒复制的影响,为深入研究IBRV免疫机制提供基础。
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