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在体外折叠实验体系中,长期以来为了简化实验,往往忽略了体外与细胞内环境最大的不同之处--大分子拥挤环境。“大分子拥挤”这一概念指的是细胞容积的20%-30%都被各种大分子(如蛋白质、多糖等)占据,这样使任何一个大分子的实际可及空间大大压缩,而绝非是体外实验时,所简化的低蛋白浓度环境。因此在大分子拥挤环境下研究蛋白质的折叠是非常必要的。
肌酸激酶(CreatineKinase,CK)(ATP:CreatineN-phosphotransferaseEC2.7.3.2)在能量代谢过程中起重要作用,它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。以来源于人肌肉的肌酸激酶(86kD)为模式蛋白,选用PEG、BSA、Dextran70,Sucrose为拥挤试剂,通过肌酸激酶在不同拥挤试剂中变性,研究拥挤环境对蛋白质去折叠的影响。结果表明,PEG和Sucrose对肌酸激酶的变性具有保护作用;BSA和Dextran70对肌酸激酶的变性没有保护作用。且PEG和Sucrose的保护作用随其浓度的增加而增大,BSA和Dextran70的相对活力随其浓度的增加而减小。
由于目前对于拥挤试剂对于蛋白质去折叠的影响,研究得并不多,而这种影响受到拥挤试剂本身特性的影响,以及蛋白质自身去折叠性质的影响,对于拥挤试剂规律性的认识还需要大量的实验。