【摘 要】
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奶牛乳房炎的抗生素防治,不仅诱导耐药菌的产生,也会残留至奶制品中,严重影响公共卫生安全。中草药临床应用广泛,安全性较高,且不易产生耐药,成为抗奶牛乳房炎药物研究的重要方向。大青木（Clerodendrum cyrotophyllum Turcz）具有清热解毒、凉血止血、祛风除湿的作用,是贵州省苗族地区常用的一种抗菌消炎药物。本研究首先通过大青木化学成分分离鉴定,探究抗奶牛乳房炎的活性组分,然后对活
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奶牛乳房炎的抗生素防治,不仅诱导耐药菌的产生,也会残留至奶制品中,严重影响公共卫生安全。中草药临床应用广泛,安全性较高,且不易产生耐药,成为抗奶牛乳房炎药物研究的重要方向。大青木（Clerodendrum cyrotophyllum Turcz）具有清热解毒、凉血止血、祛风除湿的作用,是贵州省苗族地区常用的一种抗菌消炎药物。本研究首先通过大青木化学成分分离鉴定,探究抗奶牛乳房炎的活性组分,然后对活性组分进行提取、纯化工艺优化,并对活性组分的抗氧化活性进行测试。主要研究内容及结果如下:1、大青木中化学成分的研究对大青木醇提物采用各种色谱方法进行分离纯化,共得到18个化合物,分别为木栓酮（1）、α-amyrin palmitate（2）、Sambuculin A（3）、22-dehydroclerosterol（4）、Isopetasin（5）、Taraxasteryl palmitate（6）、豆甾醇（7）、22-dehydroclerosterol-3-O-β-D-（6’-O-margaroyl）-glucopyranoside（8）、3-O-β-D-galactopyranosyl-（24β）-ethylcholesta-5,22,25-trien（9）、肉苁蓉苷D（10）、Tortoside F（11）、Balanophonin（12）、木犀草苷（13）、类叶升麻苷（14）、木犀草素（15）、Acantrifoside E（16）、Trichotomside B（17）、肉苁蓉苷C（18）。化合物2、3、5、6、8、17为首次从大青木中分离得到。2、大青木中抗奶牛乳房炎活性组分提取工艺研究在单因素试验的基础上结合Box-Behnken响应面法对大青木中抗奶牛乳房炎活性组分——类叶升麻苷和木犀草苷进行提取工艺的优化,确定最佳提取工艺条件:粒度目数100目、乙醇浓度62%、料液比1∶22、提取次数3次、提取时间1.5 h、提取温度83℃。在此条件下,类叶升麻苷及木犀草苷的平均得率分别为9.62 mg/g、2.25mg/g,相对标准偏差分别为1.00%、1.26%。3、大孔树脂富集纯化大青木中抗奶牛乳房炎活性组分工艺研究在6种大孔吸附树脂中筛选得到富集纯化大青木中抗奶牛乳房炎活性组分的最优树脂型号为HPD600,在单因素试验的基础上结合Box-Behnken响应面法对大青木中抗奶牛乳房炎活性组分进行纯化工艺的优化,确定最佳纯化工艺条件:上样液浓度8.4 mg/m L、上样液体积2.0 BV、上样液流速3.0 m L/min、洗脱液浓度53%、洗脱液体积3.0 BV、洗脱液流速4.0 m L/min。在此条件下,类叶升麻苷及木犀草苷回收率分别为75.40%、86.59%,类叶升麻苷及木犀草苷的纯度由16.56%、2.47%提高至55.57%、8.35%。4、大青木中抗奶牛乳房炎活性组分抗氧化研究以抗坏血酸为阳性对照,测定经过提取、纯化工艺优化得到的大青木中抗奶牛乳房炎活性组分的粗提物和纯化物对自由基的清除能力。活性组分的粗提物清除DPPH、ABTS、OH自由基的IC50值分别为63.53、56.37、93.76μg/m L,经过大孔吸附树脂纯化得到的活性组分的纯化物清除DPPH、ABTS、OH自由基的IC50值分别为39.74、32.66、47.07μg/m L。综上所述,本文对大青木的化学成分及抗奶牛乳房炎活性组分的提取纯化工艺进行优化研究,丰富了大青木化学成分的物质基础,同时对大青木在抗奶牛乳房炎药物研发提供了必要的技术支撑。
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