【摘 要】
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目的前列腺癌发生发展及转移的分子机制仍未明确。ANT2（腺嘌呤核苷酸转位酶2）已被报道在多种肿瘤中上调,但其在前列腺癌中的作用未知。miR-137是抑癌因子,但其与前列腺癌的关系亦有待阐明。本研究将为阐明miR-137通过靶向ANT2调控前列腺癌生长、凋亡、迁移和侵袭的机制提供实验依据。材料与方法本研究收集临床前列腺癌组织和正常组织,通过RNA测序分析、免疫组织化学、qPCR和Western bl
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目的前列腺癌发生发展及转移的分子机制仍未明确。ANT2（腺嘌呤核苷酸转位酶2）已被报道在多种肿瘤中上调,但其在前列腺癌中的作用未知。miR-137是抑癌因子,但其与前列腺癌的关系亦有待阐明。本研究将为阐明miR-137通过靶向ANT2调控前列腺癌生长、凋亡、迁移和侵袭的机制提供实验依据。材料与方法本研究收集临床前列腺癌组织和正常组织,通过RNA测序分析、免疫组织化学、qPCR和Western blot检测前列腺癌组织中ANT2在基因水平和蛋白质水平的表达情况;在前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC3和前列腺上皮细胞系RWPE-1中检测ANT2蛋白的表达;合成并验证了 siANT2的小分子干扰片段效率,CCK8和流式细胞术检测了 siANT2对细胞增殖和凋亡情况;构建了 ANT2的过表达质粒并检测其对增殖和凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达情况;转染ANT2的质粒和siRNA,通过transwell评估ANT2对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;构建ANT2（WT和MUT）的双荧光素酶质粒,通过报告基因实验验证miR-137和ANT2的靶向关系;通过CCK8和transwell评估miR-137/ANT2调节前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的作用;通过BALB/c裸鼠成瘤模型,检测了 miR-137/ANT2通路对前列腺癌细胞在体生长的影响。结果与正常组织相比,ANT2在前列腺癌组织中高表达。siANT2小分子片段可有效的抑制ANT2蛋白的表达;siANT2可抑制细胞的增殖,诱导细胞的凋亡。过表达ANT2促进前列腺癌细胞的生长,不影响细胞的凋亡。过表达ANT2促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制凋亡蛋白Bax的表达;siANT2则抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,而促进凋亡蛋白Bax的表达,active caspase-3超高表达。过表达ANT2促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力,促进基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP-1和TIMP-2的表达,siANT2则抑制前列迁移和侵袭,抑制MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的表达。qPCR实验结果表明miR-137在前列腺癌组织中明显下调。荧光素酶报告基因实验证明miR-137和ANT2存在靶向关系。miR-137 mimic抑制而inhibitor则上调ANT2的蛋白表达。CCK-8和Transwell实验表明miR-137 mimic可以拮抗ANT2的促进作用,抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭。在裸鼠成瘤实验中,miR-137 inhibitor增加ANT2的表达,抵消了 shANT2引起的肿瘤抑制作用,抵消了实体瘤中 shANT2 导致的 MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、Bcl-2 及Bax的表达失调。结论（1）ANT2在前列腺癌中高表达;（2）siANT2抑制前列腺癌细胞的增殖并诱导凋亡;（3）过表达ANT2促进前列腺癌细胞的生长、迁移和侵袭能力;（4）miR-137 靶向结合 ANT2;（5）miR-137通过ANT2抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭;（6）miR-137 inhibitor抵消shANT2的实体瘤抑制作用。
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