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目的:1.观察吡那地尔后处理对大鼠缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用;2.探讨HIF-1/HRE通路在吡那地尔后处理心肌保护中的作用及激活机制。方法:应用体外心脏灌注装置（MPA）获取实验所需成年大鼠的心肌细胞,在设置为37℃的培养箱培养24h后,随机分为正常组（N组）、缺氧复氧组（HR组）、吡那地尔后处理组（P组）、五羟葵酸和吡那地尔后处理组（5HD+P组）、N-2-巯基丙酰-甘氨酸和吡那地尔后处理组（MPG+P组）、N-2-巯基丙酰-甘氨酸与二甲基乙二酰甘氨酸和吡那地尔后处理组（MPG+DMOG+P组）。按以下方式进行处理:N组:继续在培养箱中培养160min;HR组:先缺氧40min,再复氧120min;P组:缺氧40min后,吡那地尔处理5min,接着复氧115min;5HD+P组:缺氧40min后,5HD处理10min,吡那地尔处理5min,接着复氧105min;MPG+P组:缺氧40min后,MPG处理10min,吡那地尔处理5min,接着复氧105min;MPG+DMOG+P组:缺氧40min后,MPG处理10min,DMOG处理10min,吡那地尔处理5min,接着复氧95min。实验检测指标:（1）透射电子显微镜下观察复氧末各组心肌细胞超微结构,并对线粒体行Flameng评分;（2）激光共聚焦显微镜检测各组复氧末线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）;（3）ELISA试剂盒分别检测复氧25min及复氧末ROS的含量;（4）qRT-PCR法及Western-Blot法测复氧末目的基因HIF-1α、HO-1、iNOS、VEGF基因mRNA和蛋白的表达量。结果:1.透射电子显微镜下各组细胞超微结构和线粒体Flameng评分:超微结构显示:N组细胞超微结构基本正常,HR组损伤最为严重;与P组比,5HD+P组和MPG+P组损伤加重,二者间损伤差异不明显,MPG+DMOG+P组损伤与之相似;与5HD+P组相比,MPG+DMOG+P组损伤程度明显减轻（P<0.05）,MPG+P组变化不明显;与MPG+P组比,MPG+DMOG+P组损伤程度明显减轻。Flameng评分显示:N组评分最低,HR组评分最高（P<0.05）;与P组比较,HR组、5HD+P组和MPG+P组均显著升高（P<0.05）,三者间差异无统计学意义（P>0.05）,MPG+DMOG+P组稍增高,差异无统计学意义（P>0.05）;与MPG+P组比,MPG+DMOG+P组评分显著降低（P<0.05）。2.心肌细胞MMP（红/绿荧光比值）的变化:N组红绿荧光比值最高,HR组最低（P<0.05）;与P组相比,HR组、5HD+P组和MPG+P组比值明显下降（P<0.05）,且三者间差异无统计学意义（P>0.05）,MPG+DMOG+P组稍降低,差异无统计学意义（P>0.05）;与5HD+P组相比,MPG+P组降低无统计学意义（P>0.05）,MPG+DMOG+P组显著升高（P<0.05）;与MPG+P组比,MPG+DMOG+P组比值显著升高（P<0.05）。3.心肌细胞ROS含量的变化:复氧25min时刻:N组ROS含量最低,HR组、5HD+P组最高（P<0.05）,二者间差异无统计学意义（P>0.05）;与P组相比,MPG+P组、MPG+DMOG+P组降低（P<0.05）,二者间差异无统计学意义（P>0.05）;复氧120min时刻:N组ROS含量最低,HR组最高（P<0.05）;与P组相比,MPG+DMOG+P组变化无统计学意义（P>0.05）,5HD+P组、MPG+P组含量均升高（P<0.05）,且二者间差异无统计学意义（P>0.05）;5HD+P组、MPG+P组高于MPG+DMOG+P组（P<0.05）。与复氧25min时刻相比,复氧120min时刻N组、HR组、5HD+P组和MPG+DMOG+P组ROS含量的差异无统计学意义（P>0.05）;P组降低（P<0.05）;MPG+P组升高（P<0.05）。4.HIF-1α、HO-1、iNOS和VEGF mRNA的表达量:HIF-1α的mRNA在各组之间表达无差异（P>0.05）。与N组相比,HO-1、iNOS和VEGF三种基因的mRNA的表达在其余组明显上升（P<0.05）,其中P组和MPG+DMOG+P组表达最高（P<0.05）,二者间差异无统计学意义（P>0.05）;与P组相比,HO-1、iNOS和VE GF三种基因mRNA的表达在HR组、5HD+P组和MPG+P组显著降低（P<0.05）,且三者间差异无统计意义（P>0.05）;与5HD+P组、MPG+P组相比,MPG+DMO G+P组表达显著升高（P<0.05）。5.HIF-1α、HO-1、iNOS和VEGF蛋白水平表达量:与N组相比,其余组目的基因蛋白表达均明显升高,且P组和MPG+DMOG+P组最高（P<0.05）,二者间差异无统计学意义（P>0.05）;与P组相比,HR组表达降低（P<0.05）,5HD+P组和MPG+P组将P组蛋白高表达抑制（P<0.05）;与5HD+P组、MPG+P组相比,MPG+DMOG+P组表达显著升高（P<0.05）。结论:基于本实验的研究条件及研究结果,得出:1.HIF-1/HRE通路参与了吡那地尔后处理对大鼠缺氧复氧心肌细胞的保护作用。2.吡那地尔后处理通过开放mitoKATP,产生适量ROS作为信号分子,激活HIF-1/HRE通路,进一步促进下游HO-1、iNOS、VEGF基因表达,起到对缺氧复氧心肌细胞的保护作用。