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目的:重症急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis,SAP)常伴有肠粘膜屏障功能的损伤。近年来,细胞焦亡是炎性疾病的研究热点之一,而Gasdermin D(GSDMD)是细胞焦亡的关键蛋白,在Caspase激活后,GSDMD可裂解为N端和C端,其中N端可以在细胞膜上打孔,使细胞裂解焦亡。细胞焦亡在感染性疾病肠道损伤中发挥重要作用,但在SAP所造成的肠粘膜屏障功能损伤中是否发挥作用还未见报道。本研究主要探讨GSDMD在SAP造成的肠道损伤中的作用机制,为SAP肠粘膜屏障损伤的治疗提供新的思路。方法:将24只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水(NS)组、小干扰RNA(siRNA)-NS组、SAP模型组和siRNA-SAP组,每组6只。实验前小鼠禁食18h,不禁饮。构建SAP小鼠模型方法是通过腹腔注射雨蛙素50μg/kg联合脂多糖(LPS)10mg/kg;NS组给予等量NS;siRNA-SAP组和siRNA-NS组在制模或注射NS前分3次经尾静脉注射siRNA50mg/kg。制模12 h后取各组小鼠眼球血,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平。处死小鼠后观察其腹腔内大体改变;提取小鼠胰腺和肠道组织,光镜下观察胰腺及肠粘膜病理学改变;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道组织长链非编码RNA uc.173(lnc uc.173)表达;采用免疫组化法检测肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白带状闭锁蛋白-1(ZO-1)及闭合蛋白(Occludin)的表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肠道组织GSDMD蛋白表达。结果:大体观察显示,NS组、siRNA-NS组小鼠腹腔内无明显异常改变,SAP组小鼠腹腔内可见少量血性腹水、肠道充血水肿,siRNA-SAP组小鼠腹腔血性腹水量较SAP组下降,症状较轻,肠道有充血水肿。HE结果显示光镜下,NS组、siRNA-NS组小鼠胰腺未见明显变化,肠粘膜未见明显损伤。SAP组小鼠胰腺有出血、坏死,炎细胞浸润,部分小叶结构破坏,同时肠道组织可见绒毛不同程度脱落、断裂,炎细胞浸润,部分肠道萎缩坏死,siRNA-SAP组小鼠胰腺有炎细胞浸润,胰腺细胞水肿,小叶结构部分破坏,但病理损伤程度较SAP轻,肠道粘膜不同程度炎细胞浸润,肠道绒毛部分萎缩脱落,二者差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示,SAP模型组肠道组织lnc uc.173表达较NS组和siRNA-NS组显著降低(2-ΔΔCt:0.26±0.12比1.01±0.37、0.67±0.32,均P<0.05);而siRNA-SAP组lnc uc.173表达较SAP组明显升高(2-ΔΔCt:0.60±0.39比0.26±0.12,P<0.05)。Western blotting显示,SAP模型组肠道组织GSDMD蛋白表达水平较NS组和siRNA-NS组明显升高[GSDMD蛋白(GSDMD-N/β-actin):1.99±0.46比1、1.00±0.78,均P<0.05];与SAP模型组相比,siRNA-SAP组GSDMD蛋白表达明显下降[GSDMD蛋白(GSDMD-N/β-actin):1.42±0.42比1.99±0.46,P<0.05]。免疫组化结果显示NS组、siRNA-NS组ZO-1、Occludin均沿肠道上皮细胞分布,呈强烈的深棕褐色信号,细胞数量多,SAP组、siRNA-SAP组ZO-1、Occludin沿肠道上皮细胞分布,分布位置与NS组无明显差异,但呈浅棕褐色,细胞数量较NS组低,相对表达量下降,四组小鼠ZO-1[18.2±1.75,18.12±1.64,6.62±1.06,11.38±1.06],Occludin[16.17±0.98,15.56±1.75,7.00±0.63,12.00±0.63]表达水平比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。ELISA结果显示SAP组和siRNA-SAP组IL-1β、IL-18浓度较NS组上升,四组小鼠血清IL-1β[(44.48±5.76,81.49±10.75,146.66±1.40,116.26±15.54)ng/L],IL-18[(115.43±16.4,84.84±21.9,950.47±177.09,689.96±126.08)ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:SAP小鼠全身炎症反应及其肠粘膜屏障损伤可能与肠道组织中GSDMD蛋白表达升高有关。SAP小鼠肠道长链非编码RNA uc.173含量降低,肠道粘膜自我修复能力减弱,同时实验结果表明,GSDMD通过介导细胞焦亡,使IL-1β、IL-18释放量增加,同时下调SAP肠道组织粘连蛋白ZO-1、Occludin的表达,导致肠粘膜屏障功能损伤。