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研究目的:原发性肝癌是常见的恶行肿瘤,其中肝细胞癌占约90%,死亡率居全世界恶性肿瘤第5位。本课题通过细胞生物学和动物实验进行探索与验证TTYH3在肝癌细胞的增殖与转移中的作用。分析TTYH3在临床肝癌标本中的表达和相关临床指标的联系,希望能够为肝细胞癌复发及转移的早期诊断和治疗提供预测指标及治疗靶点。研究方法:我们通过生物信息学方法分析了TTYH3在肝癌中的表达情况,以及TTYH3在肝癌中与多种临床指标的相关性情况。收集临床肝癌标本,进行免疫组化和实时定量PCR实验,验证TTYH3基因在肝癌和癌旁中的表达。对肝癌细胞系HCCLM3细胞进行质粒转染达到过表达和对Hep3B细胞进行siRNA转染,干扰TTYH3的表达;然后通过进行CCK8实验和克隆形成实验,探究TTYH3对肝癌细胞增殖能力的影响;通过对HCCLM3细胞和Hep3B细胞进行划痕实验和Transwell实验,探究TTYH3对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。由慢病毒构建稳定表达TTYH3的HCCLM3细胞株,通过尾静脉注射肝癌稳转株,进行体内实验,构建肝癌转移动物模型,观察裸鼠肺部转移灶数量,以及对转移灶组织进行HE染色,验证TTYH3在动物体内对肝癌细胞转移的影响。最后,通过免疫印迹实验,探究TTYH3对Wnt/β-catenin信号通路的影响。实验结果:(1)通过TCGA数据库分析TTYH3的表达情况,发现TTYH3在多种恶行肿瘤中高表达,在肝细胞癌中,相对于癌旁组织,TTYH3在肝癌中表达上调。此外,TTYH3随着肝细胞癌患者病理分级上升,表达也随之增加,随着肝癌分期越差,TTYH3表达也随着增加。TTYH3在有淋巴转移的患者标本中表达增加,并且TTYH3的表达与肝癌发生TP53突变事件具有相关性。同时发现,TTYH3在肝细胞癌中的表达与β-catenin在肝细胞癌中的表达具有正相关。(2)应用免疫组化发现,临床标本中肝癌组织中的TTYH3表达要高于癌旁组织;实时定量PCR实验发现,同肝癌周围组织相比,肝癌组织中TTYH3的mRNA水平显著上调(P<0.001)。(3)通过CCK8实验和克隆形成实验,发现TTYH3与肝癌细胞的增殖活力相关,且在HCCLM3中高表达TTYH3时,CKK8结果要高于对照组(P<0.01),且克隆形成能力高于对照组。在Hep3B中干扰TTYH3的表达,CCK8结果低于对照组(P<0.01),同时克隆形成能力减弱。(4)通过划痕实验和Transwell实验发现,在HCCLM3中高表达TTYH3时,肝癌细胞具有更高的转移和侵袭能力(P<0.01),在Hep3B中干扰TTYH3的表达,肝癌细胞的转移和侵袭能力变弱(P<0.01)。(5)通过体内实验,上调TTYH3基因的表达后,裸鼠肺部转移灶增多(P<0.05),肝癌的转移情况显著。(6)通过蛋白印迹实验,TTYH3能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响肝癌细胞的增殖和转移,同时可以影响凋亡相关蛋白bcl2和bax表达从而调节增殖情况。结论:TTYH3在肝癌组织中表达上调,能够促进肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的转移和侵袭能力,同时也促进了裸鼠体内肝癌细胞的转移能力。