【摘 要】
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罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)是我国主要淡水养殖经济虾类之一。生长和繁殖性能是所有经济种类的二个关键性状,相对生长性状,繁殖性能的研究不多。因此,深入研究罗氏沼虾性腺发育的基本规律,有助于在其生长、繁殖的关键节点,通过人为干预提高亲虾个体规格、繁殖力及虾苗成活率,是培育优良亲本的前提。本研究采用常规石蜡切片、表型数据测量分析及转录组测序的方法,对罗氏沼虾性腺发育的组
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罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)是我国主要淡水养殖经济虾类之一。生长和繁殖性能是所有经济种类的二个关键性状,相对生长性状,繁殖性能的研究不多。因此,深入研究罗氏沼虾性腺发育的基本规律,有助于在其生长、繁殖的关键节点,通过人为干预提高亲虾个体规格、繁殖力及虾苗成活率,是培育优良亲本的前提。本研究采用常规石蜡切片、表型数据测量分析及转录组测序的方法,对罗氏沼虾性腺发育的组织学、性腺发育与生长的关系及性腺发育的分子调控机制进行了研究。得到的主要结果如下:1.基于性腺形态及切片组织学观察的结果表明:性腺颜色、体积及细胞组成、分布均随性腺发育表现出规律性变化,卵巢发育划分为8个时期,精巢发育分为4个时期。卵巢外部形态发育与内部组织学变化同步性高,随卵巢成熟度增加,不同阶段生殖细胞由生发区向外形成环状分区;Ⅰ期~Ⅲ期卵巢体积、生殖细胞大小及性腺指数(GIS)增长缓慢,主要进行生殖细胞数量积累,Ⅳ期~Ⅶ期卵巢体积、生殖细胞大小及GIS增长迅速,生殖细胞在增殖同时,营养物质积累迅速。可根据卵巢颜色、体积、色素分布等推测其内部组织细胞的发育情况。精巢形态发育和组织发育同步性较差,精巢体积、生殖细胞大小、种类及GIS在精巢成熟过程中变化较小;Ⅰ期精巢主要进行个体生殖功能的完善,Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期精巢则整体表现为个体生殖能力的强化过程。2.对不同养殖时长个体的性腺指数、不同性腺发育阶段个体出现频率进行统计分析,结果表明:卵巢发育随养殖时间的增加可分为3个主要阶段,养殖83d~90d为生殖细胞积累阶段,养殖97d~104d为内源性卵黄合成阶段,养殖111d~146d为外源性卵黄合成阶段。雄虾性腺指数及不同精巢发育时期个体频率无明显规律性变化。对体长、体重等13个表型性状进行相关分析和通径分析,结果表明:卵巢发育限制了雌虾重量性状及头胸甲长度性状的生长,但腹部长度性状的生长未受到明显抑制,这可能与雌虾通过扩大腹部容量来提高个体繁殖力有关。精巢发育对雄虾的个体生长未表现出明显的抑制作用。同一生长阶段不同性别及不同生长阶段影响罗氏沼虾体质量的关键表型性状是不同的。决定程度分析结果显示,保留性状与体质量的复相关系数达到0.99,表明已获得影响体质量的关键性状。3.通过对不同发育时期精巢、卵巢组织的转录组测序分析,获得146537个unigene,N50和平均长度分别为2008 bp和1144 bp。基因差异表达分析结果表明,在卵巢不同发育时期比较组、精巢不同发育时期比较组及精巢和卵巢比较组中分别有468个、339个和7933个基因差异表达。KEGG富集分析中共获得了胰岛素合成、卵母细胞成熟、类固醇生物合成等13个与性腺发育相关的信号通路,主要涉及激素代谢调控、性细胞增殖发育、氨基酸代谢等生物过程。对上述通路中的共有差异表达基因分析发现,胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)、热休克蛋白90(Hsp 90)、环氧合酶(COX)等基因在卵黄蛋白合成时期高表达,可能参与了卵黄积累及卵子发生过程,钙调素(Ca M)等基因在精巢发育过程中高表达,可能在精子发生过程中起到重要调控作用。本论文研究获得了罗氏沼虾初次性成熟性腺发育的形态学及组织学规律,对生长与性腺发育的相关性也进行了初步分析,同时筛选获得了大量性腺发育相关的差异表达基因。这可以为在育苗生产及商品虾养殖过程中,从性腺发育角度掌握个体生长状态提供参考依据,也可以为后期进一步探索罗氏沼虾性腺发育的分子调控机制提供理论基础。
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