【摘 要】
：
目的:克隆人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF)的编码框,构建携带BDNF基因的重组质粒pEGFP-BDNF。为进一步基因治疗感音神经性聋奠定基础
论文部分内容阅读
目的:克隆人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF)的编码框,构建携带BDNF基因的重组质粒pEGFP-BDNF。为进一步基因治疗感音神经性聋奠定基础。方法:(1)克隆人BDNF cDNA:选用培养符合标准的Hale细胞,利用Trizol试剂提取总RNA;RT-PCR扩增人BDNF cDNA片段;克隆到pMD18-T Vector载体。(2)pEGFP-BDNF的构建和鉴定:分别在上下游引物中引入XhoI,BAMHI酶切位点,再次克隆到pMD18-T中,转化大肠杆菌,筛选阳性重组子。BDNF与pEGFP-N2载体经XhoI,BAMH I双酶切,T4 DNA连接酶连接,DNA测序鉴定插入片段与开放读码框的正确性。(3)细胞转染:利用脂质体法将重组质粒pEGFP-BDNF转染Hale细胞。(4)检测融合蛋白pEGFP-BDNF的表达:利用荧光显微镜观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测转染细胞中BDNF的表达。结果:克隆人BDNF cDNA,成功构建了重组质粒pEGFP-BDNF,转染Hale细胞48小时后,荧光显微镜观察转染细胞中有绿色荧光,Western blot检测进一步证明构建的pEGFP-BDNF能在Hale细胞中表达目的基因BDNF蛋白。结论:成功构建表达重组质粒pEGFP-BDNF,为研究BDNF在体内外转基因治疗内耳疾病,感音神经性耳聋奠定了一定基础。
其他文献
目的：研究高血压合并急性脑梗死或无症状脑梗死患者的动态血压特征和临床意义。 方法：选择2012年9月～2013年11月在河北联合大学附属医院心内科及神内科住院的高血压患者，根据
目的:1.调查葡萄膜炎患者治疗后的视觉相关生活质量(VRQoL),分析其与视功能之间的关系及其影响因素。2.比较不同葡萄膜炎患者治疗后的视觉相关生活质量有无差异。3.调查葡萄
幸福人寿监事会主席、中房集团理事长孟晓苏说市场供应过剩是笑话,政府不要救市松绑即可房地产商是被钱给撑死的——华友世纪总裁兼CEO向松祚中央到地方不宜再实施同一住房政
祝《中国电视》以文化自觉、文化自信、文化自强意识,办成化人养心的一方净土。中国文联原副主席、著名文艺评论家仲呈祥“春色满园关不住,一枝红杏出墙来。”——诚祝《中国
目的本研究采用免疫组织化学技术(Immunohistochemical technique,Ihc)检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、CD68在结节性血管炎的表达及MCP-1和ICAM-
分析了光网络中大功率信号引起的带内串扰攻击,攻击信号功率和光开光串扰系数是带内串扰攻击对用户信号质量产生破坏影响的主要因素。在VPI仿真软件中搭建实验系统,以误码率
慢性软组织损伤性疼痛,主要包括肌筋膜疼痛综合征(Myofascial pain syndrome,MPS)、纤维肌痛综合征(Fibromyalgia syndrome,FMS)等,为临床上多发病、常见病,是一种无菌性炎症
如果上述分析是正确的话,那么目前房市应该还未到大拐点时刻。按照草原上“牛吃草”现象,此时房市应该继续呈现欣欣向荣的繁荣景象,不应该出现局部冷却、甚至冰火两重天的现
我国首次强制要求外国人参加社会保险,本文分析了扩大社会保险保障对象须考量的因素,提出了外国人在我国参加社会保险法律机制存在的不足,并给出了完善建议。主要为修正“在
媒体的困局其实是我们自己的人性的矛盾的一种表现。 我们似乎已经进入了一个“丑闻”时代，接连爆响的私生活“丑闻”以一种惊人的戏剧化的方式凸现了我们面对的媒体的困局。私生活现在变成了公共生活的焦点，人们往往依赖私生活才能进入公共生活，而公共生活似乎只有通过私生活才可能被公众所瞩目。人们“围观”的不是你的公共生活中的工作，而是只有在私生活的八卦丑闻背后的神秘。人们往往不关心许多大事，但网络上的八卦