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目的:端粒酶是由RNA和蛋白质组成的具有逆转录活性的核糖核蛋白酶,它是肿瘤发生的必经通路和肿瘤生长的必需成分。因此,端粒酶可作为研究抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡的一个最为理想的靶点。目前,人们正在采用各种策略去抑制端粒酶的活性来治疗肿瘤。最近,国内外的研究发现,IFN-α在某些肿瘤细胞中,如某些恶性血液细胞,有抑制端粒酶活性的作用,而c-myc癌基因有激活端粒酶活性的作用。但是,IFN-α及c-myc反义癌基因对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的作用如何,国内外还尚未报道。本研究主要是利用细胞因子和反义基因抗癌治疗的原理,就IFN-α及c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响及其具体机制作一初步研究,并观察IFN-α与c-myc反义寡核苷酸联合作用对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响,从而进一步探讨IFN-α与c-myc反义基因抗癌治疗的作用机制,为探索一条更加有效的生物治疗肝癌途径提供理论基础。 方法:本研究主要通过IFN-α 2b及c-myc反义寡核苷分别和联合应用作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,应用免疫组化、RT-PCR、PCR-ELISA等方法,观察c-myc蛋白、端粒酶结构基因hTR、TP1、hTERT的mRNA以及端粒酶活性表达水平的变化。 结果:利用10μmol/L浓度的c-myc反义寡核苷酸及5000U/mL的IFN-α 2b作用于人肝癌细胞SMMC-7721 24h、48h后,相应的c-myc蛋白、端粒酶催化亚单位hTERT mRNA及其端粒酶活性表达的下降与相应的空白对照组相比,差异有显著性(p<0.05或p<0.01);而TP1和hTR mRNA表达的下降与相应的空白对照组相比,差异未见显著性(p>0.05)。另外,IFN-α和c-myc反义寡核苷联合治疗组与其相应的单独治疗组相比,其相应的c-myc蛋白、端粒酶催化亚单位hTERT mRNA及其端粒酶活性表达的下降,差异有显著性(p<0.05或天津医科大学硕士研究生论文中文摘要p<0.01):而工FN一a组和c一myc反义寡核普组之间则无显著性差异(p>0 .05)。结论:1) IFN一a和c一myc反义寡核昔酸对人肝癌细胞S枷C一7721端粒酶活性的表达都有抑制作用。因此,工FN一Q与。一myc反义基因抑制肿瘤细胞增殖的另一机制可能系通过抑制端粒酶活性的表达所致。 2)工FN一a和。一myc反义寡核昔酸抑制端粒酶的活性与端粒酶催化亚单位hTERT mRNA的表达密切相关,而与hTR、TPI mRNA的表达无关。可能说明了hTR和TPI是端粒酶活性必需的组份,但不影响端粒酶活性的高低。 3)IFN一a和c一myc反义寡核普酸抑制端粒酶活性的机制可能系通过先抑制c一myc癌基因的表达而导致端粒酶催化亚单位hTERT的表达下降,最终导致端粒酶活性的表达下降这一通路而实现的。 4)工NF一Q和c一myc反义寡核普联合应用抑制端粒酶的活性大于其单独作用,其机制可能系其共同抑制c一myc癌基因的表达所致。因此,INF一a和c一myC反义寡核普联合应用来治疗肿瘤应比单一应用更加有效。