【摘 要】
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目的:以广西特有中药材走马胎为原料,深入研究了走马胎多糖的提取工艺、及其体外抗氧化、抗肿瘤活性及机制。方法:1.走马胎多糖提取工艺的优化与抗氧化活性的研究:道地药材走马胎为主要实验材料,以单因素试验和响应面法相结合的方法优化走马胎多糖的提取工艺,并对其抗氧化活性做出评估。通过提取温度、液料比、提取时间、提取次数和醇沉比5个因素进行单因素分析和响应面试验,得到走马胎多糖提取工艺中的最佳参数。再通过D
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目的:以广西特有中药材走马胎为原料,深入研究了走马胎多糖的提取工艺、及其体外抗氧化、抗肿瘤活性及机制。方法:1.走马胎多糖提取工艺的优化与抗氧化活性的研究:道地药材走马胎为主要实验材料,以单因素试验和响应面法相结合的方法优化走马胎多糖的提取工艺,并对其抗氧化活性做出评估。通过提取温度、液料比、提取时间、提取次数和醇沉比5个因素进行单因素分析和响应面试验,得到走马胎多糖提取工艺中的最佳参数。再通过DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除试验来评价其抗氧化活性。2.抗卵巢癌活性研究:用MTT法、Hoechst 33258染色法和流式细胞术测定SKOV3和A2780细胞的增殖和凋亡,用划痕实验测定肿瘤细胞迁移,以实时荧光定量PCR检查Bcl-2、Bax m RNA的表达。免疫印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、AKT、p-Akt、PI3K蛋白的表达。结果:1.在提取温度80℃、液料比1:21 g·m L-1、提取时间2.5 h、提取次数4次、醇沉浓度为83%条件下,走马胎多糖提取率最高。最佳条件下实际测得走马胎多糖的平均提取率为3.03%。体外抗氧化试验显示,在0.0625-1.0 mg·m L-1的浓度范围内,走马胎多糖对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基都具有较好的清除作用。2.走马胎多糖取物对两种卵巢癌细胞的增殖具有浓度依赖性。IC50分别为64.23μg·m L-1、74.53μg·m L-1。提取物增加了Bax m RNA表达,降低了Bcl-2 m RNA表达。上调Bax表达,下调Bcl-2蛋白表达;激活Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9;降低p-ERK/ERK和p-JNK/JNK比值,降低p-AKT/AKT比值,降低PI3K蛋白表达。结论:采用单因素试验结合响应面法优化走马胎多糖的工艺具有可行性,且提取得到的走马胎多糖具有一定的抗氧化作用。走马胎多糖能够抑制SKOV3和A2780卵巢癌细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2、Caspase家族、MAPK、AKT/PI3K信号通路有关。
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