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目前,与记忆有关一系列疾病普遍存在且严重影响老年人的生活能力。海马是学习记忆的关键部位,各种药物对海马神经元的损伤是导致记忆下降的重要原因之一。海马神经元细胞损伤后,由于轴突不能自发再生,能引起大脑神经细胞的萎缩、丢失和死亡。尽管在各国医学家们的努力下取得了许多突破性进展,但是在有效药物的选择与治疗上仍存在许多急待解决的问题。放线菌素D(actinomycinD)是抗癌药物的一种成分;亚硝酸钠(Sodium Nitrite)是一种具有氧化性的食品添加剂能造成大脑缺氧;磷脂酸(phosphatidic acid,PA)作为细胞膜的成分之一,能使细胞内钙库释放钙离子和细胞外钙进入,增加细胞内钙离子的浓度,但细胞内钙离子过多,会引起钙超载(calcium overload)。前人很少研究PA在钙离子调节方面对细胞的影响,因此本论文分别以放线菌素D和亚硝酸钠刺激大鼠海马神经细胞,在细胞水平上研究实验中浓度的PA对受损的海马神经元的影响。目的:研究不同浓度的磷脂酸(PA)对原代培养的大鼠海马神经元内钙离子的影响,探索出能使大鼠海马神经元内钙释放和外钙进入的最佳PA浓度。同时研究该浓度的PA对受损海马神经元的影响。方法:摸索出诱导细胞内钙释放和外钙进入的最佳PA浓度。用不同浓度放线菌素D或亚硝酸钠处理不同时间刺激细胞,诱导原代培养大鼠乳鼠海马神经元凋亡。应用吖啶橙染色和激光共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope,LSCM)检测细胞凋亡率,Fluo3-AM检测钙离子荧光, ELISA试剂盒(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测Caspase-3凋亡酶活性,从而探讨出该浓度PA对受刺激后海马神经元的影响。结果:10μg/ml PA是诱导大鼠海马神经元内钙释放和外钙进入的最佳浓度。药物刺激细胞结果显示:0.05 mg/L放线菌素D刺激4小时或20μmol/L NaNO2刺激12小时,实验结果比较理想。吖啶橙染色、Fluo3-AM荧光以及Caspase-3凋亡酶活性变化结果显示:10μg/ml PA使细胞出现钙超载现象,进一步加剧受刺激后细胞的凋亡程度。结论:1、Fluo3-AM钙离子荧光曲线显示:10μg/ml PA可以较好地促进细胞内钙库释放钙离子和细胞外钙进入。2、放线菌素D诱导细胞凋亡结果显示适宜采用0.05 mg/L放线菌素D诱导海马神经元4h建立凋亡模型。3、20μmol/L NaNO2诱导海马神经元12h可以建立凋亡模型。4、吖啶橙染色、钙离子荧光以及Caspase-3凋亡酶活性结果显示:对于被药物刺激的细胞而言,PA增加了凋亡酶活性和细胞内钙离子浓度,加剧了细胞的凋亡。