ZmPYL及ZmPP2C-A家族基因调控玉米非生物胁迫应答的功能及自然变异研究

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玉米是全球最重要的粮食作物之一,在保障世界粮食安全生产中占有极其重要的地位。但是干旱、盐碱等非生物胁迫因子,严重制约了玉米高产稳产和种植面积的扩大。植物激素脱落酸(ABA)在植物响应逆境胁迫过程中发挥着举足轻重的作用。PYR1/PYL/RCARs基因编码ABA受体,在ABA信号传递中发挥关键作用。另外拟南芥ABA信号通路的核心成员A类PP2C磷酸酶(PP2C-A)在ABA通路中的作用已经得到了很好的研究。然而玉米PYL和PP2C-A在非生物胁迫应答反应中的作用及其自然变异仍然在很大程度上未知。我们鉴定到13个玉米PYL家族基因(ZmPYL1~ZmPYL13),分布在除第7号染色体外的所有其他染色体上。序列分析显示,这些PYL家族成员可分为I和II两个亚组,其中I亚组基因内含子数量少于II亚组基因。进一步表达分析表明,ZmPYLs可以响应多种非生物胁迫。ZmPYLs过表达材料表型鉴定显示,过表达ZmPYL3,ZmPYL9,ZmPYL10和ZmPYL13可以显著提高转基因植株对ABA的敏感性;而过表达ZmPYL8,ZmPYL9和ZmPYL12可显著增强植株的耐旱性。进一步分析表明,转基因耐旱株系中脯氨酸的积累和干旱相关标记基因的表达,相对于野生型均得到增强。以上实验结果表明ZmPYL8,ZmPYL9和ZmPYL12在植物抗旱中具有积极作用。同时,基于368个玉米自交系的关联分析,我们在基因ZmPYL8和ZmPYL12中均检测到与抗旱性显著相关的自然变异。我们发现不同ZmPP2C-As基因在不同器官响应外源ABA处理下的表达模式不同,暗示这些成员在ABA通路中可能存在功能分化。另外我们也观察到ZmPP2C-As基因的表达在盐处理前后发生了显著变化,暗示着ZmPP2C-As基因在调控玉米盐胁迫反应中可能有重要作用。进一步的转基因实验结果显示,与野生型植株相比,过表达ZmPP2C-A1,ZmPP2C-A2和ZmPP2C-A6的转基因家系在ABA和NaCl处理后的萌发率提高,表明ZmPP2C-As在玉米中参与感受和应答盐胁迫,是一类非常重要的逆境相关调控因子。然而与野生型植株相比,过表达ZmPP2C-A2和ZmPP2C-A6的植株在干旱处理后存活率降低,叶片失水率更高,同时脯氨酸积累更少,表明这些基因负调控干旱响应。同时我们还分析了ZmPP2C-As的自然变异与耐旱性的关系,发现ZmPP2C-A6存在与玉米抗旱性显著相关的自然变异。众所周知,玉米祖先大刍草较之现代玉米,有包括抗旱性在内的许多优良抗性特征。为了进一步挖掘PYL和PP2C-A家族基因在野生资源中潜在的抗性变异位点,我们利用优良自交系Zong3与野生种大刍草构建的BC2F6群体Zong3-Teosinte(ZT),以耐旱池春秋两季干旱处理后获得的存活率为指标,结合已经发表的ZT群体基因型,检测到39个与干旱相关的QTLs。结合197份玉米材料的表达谱数据和关联分析结果,在上述QTL区间内共筛选到25个干旱应答基因,且含有与抗旱性显著相关的单核苷酸变异位点,推断这些基因可能是大刍草重要的抗旱候选基因。遗憾的是,这25个基因不包含PYL和PP2C-A家族成员,这可能是因为大刍草和Zong3所拥有的变异有限。尽管如此,该群体及其候选基因将为玉米抗旱的深入研究提供材料与基因资源。总之,本研究通过表达分析、基因转化、生理测定等多种实验,证实ZmPYLs和ZmPP2C-As家族成员在应对干旱和高盐等非生物胁迫中发挥了重要作用。我们的结果加深了对ZmPYL和ZmPP2C-A基因在非生物胁迫响应中的功能认识。ZmPYL和ZmPP2C-A基因中发现的自然变异可作为抗旱玉米分子育种的潜在功能标记。
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