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目的:通过氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）干预原代小胶质细胞模拟体内缺血小胶质细胞,明确小胶质细胞在OGD/R不同时间段的表型变化;通过OGD/R干预HT22细胞模拟体内缺血神经元,探讨M2表型小胶质细胞外泌体对OGD/R HT22细胞的影响,利用生物信息学分析M2表型小胶质细胞外泌体内容物可能减轻缺血性脑卒中的分子机制,为缺血性脑卒中的研究提供基础数据参考。方法:1.将成功分离的原代小胶质细胞培养基更换为无糖培养基,置于95%N2+5%CO2缺氧小室中培养1h,继而将培养基更换为含10%血清的DMEM/F-12培养基,常氧条件继续培养12、24、36h,Western Blot检测CD206表达水平,评估OGD/R后小胶质细胞表型变化。2.将20ng/m L白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）加入BV2细胞及原代小胶质细胞中分别干预40、12h,Western Blot检测CD206表达水平,诱导M2表型小胶质细胞。收集M2表型BV2细胞条件培养基并提取外泌体。将HT22细胞培养基换为无糖培养基,并置于95%N2+5%CO2缺氧小室中培养6h,加入不同浓度（2.5、5、10和20μg/m L）M2表型BV2细胞外泌体,常氧条件共培养24h,选取保护作用最佳的外泌体浓度,CCK-8检测细胞活力变化;Western Blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）表达水平。3.利用GEO数据库检索获取M2表型小胶质细胞miRNA数据集,通过GEO2R在线工具筛选其差异表达miRNA（differentially expressed miRNA,DEMs）;利用GEO数据库及文献检索获取M2表型及静息态小胶质细胞外泌体中miRNA;将M2表型小胶质细胞DEMs与小胶质细胞外泌体的miRNA取交集,通过miRDB数据库及Targetscan数据库预测交集miRNA靶基因;同时,利用GEO数据库检索获取大脑中动脉闭塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/re-perfusion,MCAO/R）m RNA数据集,并利用GEO2R在线工具筛选其差异表达基因（differentially expressed gene,DEGs）,将交集miRNA靶基因与MCAO/R数据集中上调的DEGs取交集,对交集基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析,构建PPI网络,根据degree值筛选前10位枢纽基因（Hub genes）,并验证Hub基因在GSE97537数据集中表达情况。结果:1.小胶质细胞中CD206在OGD/R 12h后表达上调（P＜0.05）,在36h后表达下调（P＜0.05）,表明小胶质细胞在OGD/R早期以M2表型为主,之后M2表型逐渐弱化。2.IL-4成功诱导M2表型小胶质细胞。M2表型BV2细胞外泌体（10、20μg/m L）显著提高了HT22细胞活力,并且20μg/m L浓度处达到较好保护效应（P＜0.001）。Western Blot结果显示,M2表型BV2细胞外泌体（20μg/m L）干预后,OGD/R HT22细胞中Bax表达下调（P＜0.05）,Bcl-2表达上调（P＜0.05）,说明M2表型BV2细胞外泌体可通过调控凋亡蛋白表达水平,对OGD/R HT22细胞发挥保护作用。3.GEO2R在线工具筛选出316个M2表型小胶质细胞DEMs,与小胶质细胞外泌体中404个miRNA取交集,交集miRNA分别为:miR-214、miR-30a-3p、miR-199b-3p、miR-340-3p、miR-345-3p、miR-2861、miR-150,通过miRDB数据库及Targetscan数据库预测交集miRNA靶基因,并将两个数据库预测的靶基因取交集,共3276个靶基因;GEO2R在线工具筛选出MCAO/R的DEGs,将上调的DEGs与7个miRNA的靶基因取交集,共296个交集基因,进一步对这些基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析,结果显示这些基因主要富集于炎症反应、血管生成的正向调节、对缺氧的反应等生物过程中以及粘着斑、PI3K-Akt信号通路、ECM-受体相互作用、肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路中;并构建PPI网络,按照degree值筛选出前10个Hub基因,分别为:Fn1、Cd44、Tlr4、Igf1、Cxcl12、Lyn、Col1a1、Spp1、Col1a2、Lox,其中Cd44、Spp1及Lox在验证数据集GSE97537的MCAO/R组中表达上调。结论:OGD/R早期小胶质细胞呈M2表型,之后M2表型效应逐渐弱化。M2表型小胶质细胞外泌体可提高OGD/R HT22细胞活力,改变凋亡蛋白表达水平,发挥保护作用。结合生物信息学显示,M2表型小胶质细胞来源外泌体可能通过其中miR-214、miR-30a-3p、miR-199b-3p、miR-340-3p、miR-345-3p、miR-2861、miR-150抑制靶基因表达,调控PI3K-Akt通路,改变凋亡相关蛋白表达水平,对缺血性脑卒中发挥保护效应。