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[目 的]建立丰宫并殖吸虫感染大鼠导致大鼠肺损伤模型,探讨龙胆苦苷是否通过调控TGF-β1/Smad与JNK信号通路抑制丰宫并殖吸虫所致肺部细胞凋亡和纤维化,缓解肺损伤。[方法]从昆明医科大学实验动物学部购买雄性SD大鼠,适应性喂养2周后,感染大鼠每只均采用腹腔注射的方式将6只后尾蚴注射到大鼠腹腔。(1)龙胆苦苷药物治疗的影响:从63只大鼠中随机选取10只作为正常组,其余53只大鼠感染6周后,随机剖杀3只大鼠确认是否造模成功。剩下50只大鼠用三氯苯达唑连续4天灌胃杀虫治疗(剂量为200 mg/kg/d)。将杀过虫的50只大鼠随机分为模型组、龙胆苦苷低、中、高剂量治疗组、秋水仙碱阳性药物对照治疗组,每组各10只。模型组采用生理盐水灌胃作为对照组;龙胆苦苷各药物剂量治疗组分别以50 mg/kg/d、100 mg/kg/d、200 mg/kg/d作为低、中、高剂量组进行灌胃治疗;秋水仙碱阳性药物治疗组以浓度0.25 mg/kg/d进行灌胃治疗。治疗结束后,空腹麻醉大鼠。取大鼠心尖血离心获得血清,采用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度;取肺组织做HE染色、Masson染色、TUNEL染色观察大鼠肺组织形态学改变、纤维化程度以及细胞凋亡,Western blotting、免疫组化检测通路关键因子 IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Procaspase-3、Cleaved Caspase-3、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、JNK1/2、p-JNK1/2 的蛋白表达水平变化。(2)SP600125阻滞剂的干扰影响:从21只大鼠中随机选取6只作为正常组,剩余15只大鼠感染4周后,随机剖杀3只确认是否造模成功。造模成功后将感染的大鼠随机分为SP600125阻滞剂干预组、模型组,每组各6只。SP600125阻滞剂干预组以腹腔注射的方式注入SP600125阻滞剂(25 mg/kg,DMSO溶解),共注射3次(间隔10天注射一次);模型组注射与SP600125阻滞剂干预组等量的DMSO与生理盐水。第三针注射结束后一周,麻醉大鼠后处死,取肺组织做HE染色、Masson染色、TUNEL染色观察大鼠肺组织形态学改变、纤维化程度以及凋亡情况,Western blotting和免疫组化检测通路关键因子TGF-β1、Smad3、p-Smad3、JNK1/2、p-JNK1/2的蛋白表达水平变化。[结 果]1龙胆苦苷对丰宫并殖吸虫感染导致肺损伤的影响1.1与正常组相比,模型组肺组织结构被破坏,肺组织细胞排列紊乱;与模型组相比,各药物剂量治疗组肺组织结构开始恢复,细胞排列整齐。1.2与正常组相比,模型组血清中IL-1β、IL-6以及TNF-α的含量均明显升高(P<0.01);与模型组相比,龙胆苦苷各药物剂量治疗组IL-1β和IL-6含量降低(P<0.01),存在剂量依赖性;TNF-α含量降低,其中龙胆苦苷高剂量治疗组具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,秋水仙碱阳性药物治疗组IL-1β、IL-6以及TNF-α的含量降低明显(P<0.01)。1.3与正常组相比,模型组肺组织结构被破坏,细胞排列紊乱,可见棕色凋亡细胞;与模型组相比,各药物剂量治疗组肺组织肺泡结构开始重建,细胞排列相对恢复,仅见少量棕色凋亡细胞。1.4与正常组相比,模型组肺组织纤维化明显,可见大量的蓝色胶原纤维;与模型组相比,各药物剂量治疗组肺组织纤维化程度得到改善。1.5 与正常组相比,模型组肺组织 IL-1β、IL-6、TNF-α、JNK1/2、p-JNK1/2、Procaspase-3、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平明显上调(P<0.01);与模型组相比,经龙胆苦苷和秋水仙碱药物治疗后,IL-1β、IL-6、TNF-α、JNK1/2、p-JNK1/2、Procaspase-3、Cleaved Caspase-3 的蛋白表达水平均有所下调(P<0.05)。1.6 与正常组相比,模型组肺组织 TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-Ⅲ的蛋白表达水平明显上调(P<0.01);与模型组相比,经龙胆苦苷和秋水仙碱药物治疗后,上述因子的蛋白表达水平有所下调(P<0.05)。2 JNK阻滞剂对丰宫并殖吸虫感染导致肺损伤的影响2.1与正常组相比,模型组肺组织结构被破坏,肺组织细胞排列紊乱;与模型组相比,SP600125阻滞剂干预组肺组织结构改善,肺组织细胞排列较整齐。2.2与正常组相比,模型组肺组织结构被破坏,细胞排列紊乱,可见棕色凋亡细胞;与模型组相比,SP600125阻滞剂干预组肺组织肺泡结构开始重建,细胞排列相对恢复,棕色凋亡细胞数量减少。2.3与正常组相比,模型组肺组织纤维化明显,可见大量的蓝色胶原纤维;与模型组相比,SP600125阻滞剂干预组肺组织纤维化程度得到改善。2.4与正常组相比,模型组肺组织JNK1/2、p-JNK1/2蛋白表达水平明显上调(P<0.01);与模型组相比,经SP600125阻滞剂干预后,JNK1/2、p-JNK1/2蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。与正常组相比,模型组肺组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达水平明显上调(P<0.01);模型组相比,经SP600125阻滞剂干预后,TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。[结 论]1.龙胆苦苷通过影响TGF-β1/Smad与JNK信号通路抑制丰宫并殖吸虫所致肺细胞凋亡和纤维化,缓解肺损伤程度。2.抑制JNK信号通路可以改善丰宫并殖吸虫感染导致的肺细胞凋亡和纤维化程度。