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目的：制备树突状细胞(Dendritic cell,DC)和肺癌细胞A549的融合疫苗，探究该融合疫苗的生物学特性，为今后DC/A549融合疫苗进一步的体内研究和临床应用提供实验及理论基础。 方法：1.树突状细胞与肺癌细胞A549融合细胞的制备。用密度梯度离心法从健康成人外周血分离单个核细胞，加入细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-a诱导培养7-8天后所得细胞为成熟DC，流式细胞仪检测细胞的免疫表型；用细胞膜红色荧光染料PKH-26标记肺癌细胞A549，用鼠抗人HLA-DR-FITC绿色荧光标记成熟DC，两者按1：1比例混合，在50％聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)的诱导下制备融合细胞，流式细胞仪测定融合率，激光扫描共聚焦显微镜下观察融合细胞；加入与诱导培养DC时相同浓度的细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4静置培养，24h后弃去悬浮细胞，贴壁细胞继续培养，4-5天后收集悬浮及半悬浮细胞即为筛选纯化的融合细胞。2.融合疫苗的生物学特性。体外培养DC/A549融合细胞并计数，描绘细胞的体外生长曲线，比较融合细胞与亲代DC和肺癌A549细胞在体外的分裂增殖能力；用尼龙毛柱法分离外周血T淋巴细胞，MTT法检测比较DC/A549融合疫苗、与肺癌细胞A549混合培养的DC、单纯培养的DC三者刺激T淋巴细胞的增殖能力；MTT法检测比较DC/A549融合疫苗、与肺癌细胞A549混合培养的DC以及未经抗原致敏的DC分别诱导的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTLs)体外杀伤肺癌细胞A549的细胞毒效应。 结果：1.人外周血单个核细胞经rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α诱导分化7-8天后可获得形态典型的DC，成熟DC高表达表面分子HLA-DR、CD80和CD83；50%PEG能够较有效地诱导DC与肺癌细胞A549的融合，融合率为32.76%；融合细胞呈类圆形，体积较单个肺癌细胞或树突状细胞稍大。2.DC/A549融合疫苗体外生长曲线平缓，未见明显的细胞倍增期，与亲代DC的体外生长曲线类似，而肺癌细胞A549体外增生活跃，其生长曲线未见明显的平台期。DC与肺癌细胞A549融合细胞组（DC/A549融合组）、DC与肺癌细胞A549混合培养组（DC+A549混合组）和单纯DC组均能刺激T淋巴细胞明显增殖，与T淋巴细胞对照组相比有显著性差异（P<0.05）；融合细胞组刺激T淋巴细胞的增殖能力明显高于DC与A549混合培养组、单纯DC组，差异有显著性意义(P<0.05)；混合培养DC组与单纯DC组相比(P>0.05)，尚不能认为两组刺激T细胞的增殖能力不同。DC/A549融合疫苗体外诱导的CTLs对肺癌细胞A549（靶细胞）的杀伤率为(75.48±5.06)％；DC与肺癌细胞A549混合培养诱导的CTLs对靶细胞的杀伤率为(45.46±2.88)％；未经抗原致敏的DC诱导的CTLs对靶细胞的杀伤率为(15.72±0.61)％；单纯未被刺激的T淋巴细胞对靶细胞的杀伤率为(14.53±0.74)％。DC/A549融合疫苗组诱导的CTLs对肺癌细胞A549的杀伤效应均显著高于DC与肺癌细胞A549混合培养组、未经抗原致敏的DC组及单纯T淋巴细胞组，差异有显著性意义(P<0.05)；DC与肺癌细胞A549混合培养组诱导的CTLs对肺癌细胞A549的杀伤效应显著高于未经抗原致敏的DC组和单纯T淋巴细胞组，差异有显著性意义(P<0.05)。 结论：1.人外周血单核细胞在体外可诱导分化为具有典型形态和细胞表型的成熟DC。DC与肺癌细胞A549经50%PEG诱导后的融合率与其他学者报道的融合率(25%~35%)相似，有待在今后的研究中进一步提高。2.融合疫苗在体外有显著的刺激T淋巴细胞增殖的能力；融合疫苗体外诱导的CTLs具有显著的杀伤肺癌细胞A549的能力。3.基于DC和肺癌细胞A549的融合疫苗在未来有望成为一种新的有效的肺癌免疫治疗手段。