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芽孢杆菌(Bacillus spp.)的一些种类对植物病虫害具有良好的生防活性。在微生物农药的研发和应用中,剂型是影响生物农药防治效果和市场前景的关键要素之一。Mo-Ba和Mo-Bm菌株为本实验室筛选获得的、对多种植物病原真菌具有较强拮抗性的广谱性生防细菌。本文对这两株生防菌进行了拮抗谱测定;培养条件优化;菌株的分类鉴定;可湿性粉剂剂型研制、货架期检测及生防试验;获得以下主要结果:
1.生防菌株Mo-Ba和Mo-Bm对供试的6种植物病原真菌均有拮抗作用,表现出对真菌病原菌的广谱抗菌活性。Mo-Ba和Mo-Bm发酵液对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.Sp.cuben)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium omysporumf.sp.cucumerinum)、小麦赤霉病菌(Gibberella sanbinetti)和立枯丝核病菌(Rhizoctonia solani)的菌丝生长抑制率分别为68.13％、68.53%、52.23%、46.61%、57.85%、43.45%和59.31%、66.42%、53.48%、44.49%、54.72%、41.81%。显微特征观察表明Mo-Ba菌株能使真菌病原菌菌丝和孢子畸形膨大和滞育。
2.根据形态学特征、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的亲缘关系分析,将Mo-Ba菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens;将Mo-Bm菌株鉴定为Bacillus methylotrophicus。
3.对Mo-Ba菌株的液体培养条件进行优化的结果表明其适宜的培养条件为:KMB培养基,pH7.0,接种量3%,培养温度36℃,培养时间42 h。在此条件下摇瓶培养时其生物量可达1.48×109cfu/ml。
4.通过对供试载体及助剂与Mo-Ba菌株的相容性及其相应的功能特性测定,确定制备Mo-Ba可湿性粉剂时,适宜的载体、分散剂、润湿剂、紫外保护剂和粘附剂分别为GZT、MN、K12、HZSN、ZT。
5.根据载体和助剂筛选结果,获得Mo-Ba可湿性粉剂的配方为:10%Mo-Ba原粉,5%MN,0.5%K12,1%HZSN,1%ZT,82.5%GZT。此菌剂的活菌数6.41×109 cfu/g、含水量6.3%、悬浮率71.1%、细度99.6%过400目筛、湿润时间18 s,符合微生物农药国家标准(GB20287-2006)。
6.Mo-Ba原粉在4℃、室温、30℃下存放6个月,活菌数由6.62×1010 cfu/g降至5.42×1010 cfu/g、5.21×1010cfu/g、4.96×1010cfu/g:Mo-Ba可湿性粉剂在4℃、室温、30℃下存放6个月,活菌数由6.41℃109cfu/g降至5.1×109cfu/g、4.71×109cfu/g、4.26×109 cfu/g。4℃为原粉及其可湿性粉剂的最佳存储温度。
7.Mo-Ba可湿性粉剂对烟草黑胫病、白菜根肿病和三七根腐病的温室/田间试验的防效分别为76.2%、87.8%、78.5%。