Ezrin在上皮细胞极化过程中发挥着重要作用,同时对细胞粘附、细胞迁移、细胞增殖、细胞信号传导和细胞形态的维持等多种生命活动均起到重要调节作用。磷酸化修饰是调控Ezrin活性最重要的机制。目前己鉴定的调节Ezrin功能的磷酸化位点有7个。已有的研究表明小鼠卵母细胞及附植前胚胎中都有Ezrin表达,并且存在Tyr及其他氨基酸残基的磷酸化修饰,但究竟是哪些位点发生了磷酸化?其在胚胎发育中的意义是什么?目前不得而知。本论文研究了Ezrin在小鼠早期胚胎中的表达、修饰及定位规律,探讨Ezrin对小鼠早期胚胎发育的影响,为进一步研究附植前胚胎发育提供了一定理论依据。本试验利用荧光定量PCR、间接免疫荧光实验研究了ezrin在小鼠早期胚胎中的表达、修饰及定位规律,并采用siRNA干扰手段研究了ezrin对小鼠早期胚胎发育的影响。试验分为以下3个部分：1、小鼠附植前胚胎中ezrin表达规律收集小鼠附植前各时期胚胎,提取总RNA进行反转录,以actin为内参基因,以实时荧光定量PCR方法研究小鼠早期胚胎ezrin表达规律,发现：从原核期向囊胚发育过程中小鼠胚胎内ezrin相对表达量呈现先升高后降低的趋势。在2-C期,ezrin mRNA相对表达量达到最大,极显著高于其他发育阶段的胚胎(P<0.01),之后,随着胚胎发育而迅速直线下降,到8-C期达到最低水平,随后又逐渐上升,但从桑椹胚向囊胚发育时,ezrin相对表达量以再次下降。2、小鼠附植前胚胎中ezrin的修饰及定位规律收集小鼠从原核期到囊胚期不同发育阶段的胚胎,用ezrin抗体及p-ezrin(Tyr354)及p-ezrin(Thr567)抗体进行间接免疫荧光染色,观察小鼠早期胚胎内ezrin磷酸化修饰情况及定位规律。结果发现：1)在原核期和2-细胞期胚胎中,ezrin主要定位在胞质；而从4-C到桑椹胚期,ezrin在胞质、胞核中均有定位；在囊胚期,ezrin则主要定位在细胞皮层区域；2)从原核期到囊胚期小鼠胚胎内ezrin均有部分分子发生了Tyr354磷酸化修饰,并且除原核期胚胎外,p-ezrin(Tyr354)均在细胞核内有明显富集；3)从原核期到囊胚期小鼠胚胎内ezrin均有Thr567磷酸化修饰；在原核期胚胎和桑椹胚,p-ezrin(Thr567)主要定位在皮层区,尤其是在桑椹胚外层细胞的顶膜皮层定位最多；在2-细胞期,p-ezrin(Thr567)在卵裂球的胞质和皮层区均有分布,但在细胞接触处明显富集；而在4-细胞及8-细胞期胚胎中,p-ezrin(Thr567)除在胞间连接处富集外,在核内也有明显富集；在囊胚期,p-ezrin(Thr567)主要在细胞核和细胞皮层区中富集。3、Ezrin在小鼠早期胚胎发育中的功能收集小鼠原核期胚胎平均分成2组,试验组注射验证过的ezrin siRNA,对照组注射阴性siRNA,比较两组间胚胎发育效率及囊胚细胞总数。结果发现：试验组2-细胞期、4-细胞期及8-细胞期胚胎发育率均与对照组相似,桑椹及囊胚发育率则明显低于对照组,但两组间差异不显著(P>0.05)。此外,敲低ezrin后导致小鼠囊胚荧光值和囊胚细胞鼠较对照组囊胚荧光值和囊胚细胞数减少,并且差异极显著(P<0.01)。本试验证明了小鼠早期胚胎内ezrin Tyr354和Thr567位点发生了磷酸化修饰；ezrin参与了小鼠桑-囊期胚胎发育调控。