在农业生产中,农药常被用来防治害虫、除草以及调节植物生长等,但是过量使用会导致农药残留在农产品以及环境中,严重的危害了人类和其它动物的健康。目前农药残留的检测技术主要依靠大型仪器,但仪器设备昂贵,样品前处理繁琐,并且需要专业的操作人员,难以满足现场快速检测的需求。免疫分析方法可作为仪器分析方法的补充,因简单、快速、适合现场快速筛查等优点,目前已成为研究热点。本文以甲基嘧啶磷为研究对象,设计并合成了其半抗原、人工抗原,并制备了多克隆抗体,建立了甲基嘧啶磷的间接竞争酶联免疫分析方法（Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA）;以氯吡脲为研究对象,合成其半抗原、人工抗原,并制备了氯吡脲单克隆抗体,建立了检测氯吡脲的icELISA分析方法。具体研究内容和结果如下:（1）甲基嘧啶磷人工抗原的合成与抗体的制备。在保留甲基嘧啶磷特征结构的基础上,在磷酰氯部位引入了不同的碳链,以及苯环结构,采用质谱鉴定结构;用活泼酯法偶联蛋白BSA、OVA、KLH和THY,获得7个免疫原和3个包被原,用紫外光谱仪鉴定偶联结果;将免疫原免疫雌性Balb/c小鼠,筛选得到抗血清Pr1-THY的效价为1:16000,对1μg/m L的甲基嘧啶磷药物抑制率为76.63%。（2）甲基嘧啶磷icELISA方法的建立。建立了检测甲基嘧啶磷的icELISA方法,对检测条件进行了优化。优化后的最佳反应条件为:Pr1-BSA包被原稀释4000倍（250 ng/m L）,抗体稀释倍数为16000倍,反应缓冲液为Tris-HCl,一抗反应时间为30 min,二抗反应时间为30 min。经优化后的标准曲线IC50为65.53ng/m L,检测限IC10为0.89 ng/m L,线性范围为(IC20～IC80)为16.05～267 ng/m L,建立的icELISA方法与6种结构类似物的交叉反应率均＜10%。（3）氯吡脲人工抗原的合成及单克隆抗体的制备。采用傅克反应对氯吡脲（CPPU）结构进行修饰,合成氯吡脲半抗原,质谱鉴定结构;用活泼酯法偶联蛋白BSA、OVA、KLH和THY,得到人工抗原;将免疫原免疫雌性Balb/c小鼠,筛选到了效价为1:32000,对1μg/m L的氯吡脲药物抑制率为83.30%的小鼠血清,通过细胞融合技术获得杂交瘤细胞,采用显微镜克隆技术和有限稀释方法来筛选阳性杂交瘤细胞,获得1株产单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为CPPU-a。从小鼠腹水中大量制备抗体,经鉴定抗体亚型为Ig G1,并用亲和柱层析法进行纯化。（4）氯吡脲icELISA方法的建立。建立了检测氯吡脲的icELISA方法,对检测条件进行了优化。优化后的最佳反应条件为:包被原稀释4000倍（250 ng/m L）,抗体稀释8000倍（1μg/m L）,反应缓冲液为PBS,一抗反应时间为30 min,二抗稀释倍数为5000倍。经优化后的标准曲线IC50为1.04 ng/m L,检测限IC10为0.16 ng/m L,线性范围为(IC20～IC80)为0.31～3.43 ng/m L。建立的icELISA方法与6种结构类似物的交叉率均＜10%。黄瓜和橙子样品的添加回收率在85.23%～119.14%之间,对实际样品的检测结果与LC-MS方法一致性较高。表明该方法结果可靠,可以用于实际样品检测。