老年痴呆分为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)、血管性痴呆和混合性痴呆等，其中AD是知晓最多，也是较为普遍的一种老年痴呆症。研究发现，脑内出现β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)聚集而形成的老年斑(senile plaque, SP)和tau蛋白过度磷酸化而产生的神经原纤维缠结(neuro fibrillary tangles, NFT)是AD的特征性病理改变，而神经胶质细胞结构和功能的异常变化也与AD病理生理的发生密切相关。神经胶质细胞是神经组织中除神经元以外的另一大类细胞，其中星形胶质细胞数量最多，与许多神经退行性疾病密切相关。一方面，星形胶质细胞在脑内有支持与营养作用；另一方面，AD的发展过程中星形胶质细胞出现异常增生及一些因子和蛋白的表达异常。研究发现，Aβ由39-43个氨基酸残基组成，Aβ25-35是其中的毒性片段之一，对体外培养及在体的神经细胞均具有毒性作用[1]。随着对AD研究的深入，对胶质细胞的影响越来越受到重视，这其中对星形胶质细胞的研究成为一个新的靶点，因此，任何调节星形胶质细胞异常变化都有利于神经退行性疾病的治疗。半枝莲黄酮(Scutellaria Barbata flavonoids, SBF)是从半枝莲(Scutellariabarbata D. Don)中提取分离的黄酮类化合物，现代药理发现其具有抗肿瘤、抗氧化和改善记忆障碍等多种药理学作用[2]。其多羟基结构具有较强还原性，对神经有保护作用，但对胶质细胞的影响未见报道，本研究利用Aβ25-35损伤星形胶质细胞体外模型，探讨半枝莲黄酮通过对胶质细胞的影响发挥抗痴呆作用。目的：探讨Aβ25-35对星形胶质细胞损伤及SBF的干预作用方法：1-3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养，通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等，采用免疫组化法检测星型胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein, GFAP）鉴定星型胶质细胞。培养的第3代星形胶质细胞分为空白对照组，模型组和三剂量药物组，药物组细胞分别加入17.5、35和70μg/ml半枝莲黄酮作用24h后，模型组和三剂量药物组分别加入终浓度Aβ25-35100μM作用24h后，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐（3-(4,5)-dimethylthiahiazo-2-y1)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）测定细胞存活率；分光光度法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）的含量；免疫组化法测定细胞内LDH、神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的蛋白表达；酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法测定培养液中细胞因子白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和白介素-6（interleukin-６，IL-6）的水平；蛋白质印迹法(western blotting)检测星形胶质细胞中热休克蛋白70（heat shock protein70, HSP70）的蛋白表达；反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法测定细胞中载脂蛋白E（apolipoprotein E，apoE）mRNA的表达。结果：1.大鼠星形胶质细胞的培养与鉴定培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛，第3代95%以上为星形胶质细胞，特异性抗原GFAP表达阳性，细胞分两层，上层为纤维型星形胶质细胞，胞核小，突起长而细。下层为原浆型星形胶质细胞，胞核大，椭圆，形状不规则，突起扁而宽，分支较少。2.细胞存活率、LDH的测定MTT法测定细胞存活率。紫外分光光度法和免疫组织化学方法测定细胞LDH释放量和细胞内LDH的量。与空白组相比，模型组细胞存活率明显降低（P<0.01），细胞培养上清液中LDH明显减少（P<0.01），细胞LDH蛋白表达显著降低（P<0.05）。与模型组相比，SBF17.5，35和70μg/ml SBF使细胞存活率明显提高（P<0.05），培养上清液中LDH释放量明显增加（P<0.01），能显著提高LDH蛋白表达（P<0.05）。3.星形胶质细胞中nNOS、eNOS和iNOS蛋白表达的测定通过nNOS免疫组化测定，发现星形胶质细胞中不表达nNOS。免疫组化法检测星形胶质细胞中eNOS和iNOS的蛋白表达情况。与空白组相比，模型组星形胶质细胞中eNOS明显含量降低（P<0.01），iNOS含量明显增加（P<0.01）。SBF17.5，35和70μg/ml能显著提高eNOS蛋白表达(P<0.05)，而使iNOS蛋白表达减少(P<0.01)。4．星形胶质细胞IL-1β和IL-6的测定ELISA法检测星形胶质细胞中IL-1β和IL-6的水平。结果发现，与空白对照组相比，模型组细胞培养液中IL-1β和IL-6水平明显降低（P<0.01）。与模型组相比，SBF17.5，35和70μg/ml SBF能明显提高细胞培养液中IL-1β的水平（P<0.01）；使细胞培养液中IL-6的水平显著升高（P<0.05）。5．星形胶质细胞中HSP70蛋白和apoE mRNA表达影响采用western blotting法测定星形胶质细胞中的HSP70蛋白表达，RT-PCR法检测星形胶质细胞中apoE mRNA的表达。结果发现，与空白组相比，模型组HSP70蛋白表达明显增加（P<0.01），apoE的mRNA含量明显增加(P<0.01)。而SBF17.5，35和70μg/ml能显著减少HSP70蛋白的表达（P<0.01）；SBF17.5，35和70μg/ml能明显降低apoE的mRNA含量（P<0.01）。结论：1.建立了一种有效的星形胶质细胞体外培养方法。2. SBF能够提高星形细胞存活率，改善Aβ25-35引起的星形胶质细胞LDH的异常改变。3. SBF能够提高Aβ25-35损伤星形胶质细胞中eNOS蛋白的表达，降低iNOS的表达。4. SBF能增加Aβ25-35损伤星形胶质细胞中IL-1β和IL-6的水平。5. SBF能降低Aβ25-35损伤星形胶质细胞中HSP70蛋白，apoE mRNA的表达。6. SBF对Aβ25-35损伤星形胶质细胞具有保护作用，其作用机制可能是通过增加细胞存活率，降低细胞内LDH的含量和释放量，改善星形胶质细胞功能；增加细胞中eNOS的活性，降低iNOS的活性，减轻NO对神经的损伤；增加致炎细胞因子IL-1β和IL-6的含量，降低HSP70和apoE的表达来起到神经保护作用，这种作用可能有利于对AD的治疗。