CAR-T（chimeric antigen receptor T cells）细胞疗法是一种革命性的抗癌疗法,许多人希望它有助于治愈癌症,尤其是血液系统恶性肿瘤。在CAR-T治疗过程中,血液中细胞因子水平的提高是治疗起效的标志,但是过高的细胞因子会导致严重的细胞因子释放综合征（s CRS,severe cytokine release syndrome）。s CRS会导致组织或器官损伤,甚至死亡,给CAR-T治疗增加了不可预测的风险。目前,抗IL-6受体抗体Tocilizumab和糖皮质激素是治疗s CRS的两种标准药物,但在临床的运用上仍存在许多不足之处,而且这两个药不是对所有的病人都有效。所以临床迫切希望能找到新的治疗严重CRS的药和治疗方法,以降低严重CRS患者的治疗风险。最近,芦可替尼被报道可以降低CAR-T细胞治疗时发生的CRS的严重程度,但芦可替尼对CAR-T细胞作用的确切机制仍不清楚,临床给药方法缺乏科学数据指导。在本文中,我们对芦可替尼在CRS控制中的作用及其对CAR-T细胞功能的影响进行了系统的探讨和研究。首先我们成功设计优化和构建具有靶向CD19抗原的CAR基因表达框的CAR载体,在测序验证后使用四质粒慢病毒包装系统生产慢病毒载体,并成功将CAR基因转导并表达到原代T细胞表面。随后在细胞水平上研究不同浓度的芦可替尼对CAR-T细胞及相关免疫细胞在增殖、功能、亚型等方面的影响,同时研究撤药后细胞功能的恢复情况。在动物实验水平,模拟临床CAR-T治疗的情况,比对不同剂量下与未给药组对CAR-T治疗的疗效影响程度,并研究其对CAR-T扩增细胞因子分泌等的影响。最后,基于体外及动物研究数据及结论,指导临床人体试验研究,进行临床试验。我们的实验表明,芦可替尼虽然可以显著抑制CAR-T细胞的扩增,但对其活性没有影响,并且可以使CAR-T细胞的表型特性更偏向于向有利于临床疗效的记忆型细胞富集的分化状态,从而使CAR-T细胞更易于激活和扩增。在芦可替尼的作用下,CAR-T细胞的抗原特异性杀伤能力和细胞因子释放能力都受到暂时的抑制。同时,它对其他免疫细胞也显示出明显的抑制作用。然而,当芦可替尼撤药后,CAR-T细胞的杀伤能力可以得到迅速恢复,但仍然可以维持其抑制细胞因子释放的状态。此外,在小鼠体内,我们发现芦可替尼在一定剂量下,可以显著减缓CAR-T细胞的增殖,但对其抗肿瘤效果没有显示出明显的影响。临床验证性试验中,芦可替尼可以有效控制CAR-T引起的s CRS,降低免疫细胞因子的分泌水平,在CRS缓解后及时撤药对CAR-T的治疗效果没有显著影响。我们的研究结论是,在处理严重CRS中,芦可替尼是以剂量依赖性的方式抑制免疫细胞包括CAR-T细胞的功能。但是,这种抑制作用是可逆的,一旦将芦可替尼移除,CAR-T细胞的特异性杀伤能力能够快速恢复。当使用芦可替尼控制s CRS时,可以通过给药策略将芦可替尼对CAR-T细胞的疗效的影响降低,达到既能很好控制s CRS的同时又不影响治疗效果。