捕食线虫真菌少孢节丛孢种内分化研究及杀线虫活性真菌的筛选

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少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是一种重要的捕食线虫真菌,能够通过菌丝特化形成的黏性三维菌网来捕食线虫,是研究真菌与线虫相互作用的模式真菌,具有重要的生态学意义和价值。前期通过ITS、TUB和RPB2等片段测序分析了采自中国境内不同生态环境和地理区域的A.oligospora的遗传分化和扩散,发现其至少包含三个明显分化的支系(即隐存种)。本文以73株A.oligospora菌株为研究对象,从菌株的分生孢子形态大小、实验条件下菌落的生长情况、发酵液毒杀线虫效果、捕食线虫能力及交配型基因特征等方面探究了各支系间的种内分化关系。并在水生植物内生真菌内进行了杀线虫活性菌株的筛选和对高效杀线虫菌株进行毒性代谢物初步探索。主要研究结果如下:1.本研究选择菌株的分生孢子长宽比值作为形态分析特征,发现C支系菌株的孢子长宽比明显大于A支系和B支系下的菌株,在系统发育分析中分化最远的A1支系和C支系间孢子长宽比相差也最大。2.从菌株在不同培养基和不同温度下的菌落生长情况来看,B支系和C支系下菌株对温度适应性显著弱于A支系菌株。B、C支系菌株在28℃下生长速度明显比25℃下时慢,在30℃下时菌丝完全不生长。A支系菌株在3个温度下都能正常辐射树枝状向外生长。各支系菌株在CMA和PDA培养基上生长速度要快于营养较丰富培养基TYGA。3.从菌株的产孢量、发酵液杀线虫活性和固体平板上捕食线虫能力来看,各菌株间存在显著差异,但没有表现出与各支系间系统发育分化结果的相关性。4.对少孢节丛孢的交配型基因注释发现:单一菌株只包含一个交配型位点,MAT1-1或MAT1-2,每个交配位点仅包含一个基因,其中MAT1-1-1基因含有2个内含子,编码1008个氨基酸,MAT1-2-1基因含有4个内含子,编码1142个氨基酸。A.oligospora群体内的交配型比例接近1:1,是随机交配群体,初步判断A.oligospora为异宗配合型物种。对A.oligospora群体交配型基因部分序列扩增进行系统发育分析显示与先前研究结果是相一致的。综合以上结果,得出分离自不同生态环境和地理区域的少孢节丛孢群体内至少包含有2个隐存种,隐存种内发生了明显的形态学和生物学特性的差异。5.对分离自各地的262株水生植物内生真菌进行杀线虫活性菌株筛选,获得10株具有较好毒杀线虫活性的真菌(48h下线虫致死率≥70%),其中5株高效稳定菌株皆为木霉属真菌。对其中的RH1菌株进行毒性代谢物初步探索确定该毒性代谢物为热稳定、非酸碱和非挥发性的物质。
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