【摘 要】
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目的以人骨肉瘤细胞株HOS为研究对象,研究血小板衍生生长因子受体β(Platelet-derived growth factor receptor-beta,PDGFRβ)的表达变化对其增殖、侵袭迁移能力等生物学特性的影响,探索相关机制。方法分别从mRNA和蛋白水平检测小干扰RNA(siRNA)对PDGFRβ的抑制效果,筛选出能有效抑制HOS细胞中PDGFRβ表达的siRNA,将其作用于HOS细胞
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目的以人骨肉瘤细胞株HOS为研究对象,研究血小板衍生生长因子受体β(Platelet-derived growth factor receptor-beta,PDGFRβ)的表达变化对其增殖、侵袭迁移能力等生物学特性的影响,探索相关机制。方法分别从mRNA和蛋白水平检测小干扰RNA(siRNA)对PDGFRβ的抑制效果,筛选出能有效抑制HOS细胞中PDGFRβ表达的siRNA,将其作用于HOS细胞或用PDGF-BB刺激处理细胞后用cck8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测周期相关蛋白。Transwell侵袭、迁移实验和划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力。Western blot和免疫荧光技术检测EMT相关蛋白,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果1.筛选出抑制效果最好的序列进行后续实验。2.抑制PDGFRβ表达后,HOS细胞增殖受到抑制;检测细胞周期进程发现发生了S期阻滞。进入S期的细胞数量增加了9.71%,而G2/M期的细胞数量减少了6.78%,S期相关蛋白Cyclin A1和CDK2明显降低。3.PDGF-BB刺激促进HOS细胞增殖,浓度为15μmol/L时促增殖效果最明显,最终选择15μmol/L进行后续实验。4.PDGF-BB刺激可促进G2/M期转化。细胞周期结果显示G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞数量减少,G2期相关蛋白Cyclin B1和CDK1,G1期相关蛋白CyclinE2和CDK2表达增高,且差异会随刺激时间的增加而更明显,提示可促进G2/M期转化。5.经siRNA抑制HOS细胞中PDGFRβ表达后,Transwell侵袭、迁移实验和划痕实验显示HOS细胞侵袭、迁移能力减弱。而经过PDGF-BB刺激后结果与之相反,提示PDGFRβ会影响HOS细胞的侵袭迁移能力。抑制PDGFRβ表达后,p-PI3K,p-AKT473和p-mTOR的表达量减少,但总PI3K,AKT和mTOR的表达大致保持不变。而经过PDGF-BB刺激后,磷酸化的通路蛋白分子增多,且其活化程度随PDGF-BB作用时间的延长而加深。抑制PDGFRβ表达后,E-cadherin的表达上调,而vimentin,Snail和α-SMA的表达降低。结论PDGFRβ可能通过调控细胞周期进程促进骨肉瘤细胞的增殖,通过影响PI3K/Akt/mTOR途径和上皮间质转化(EMT)在骨肉瘤转移中起重要作用。本研究提示PDGFRβ可用作骨肉瘤的潜在治疗靶标。
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