论文部分内容阅读
母乳是婴幼儿最理想的食物,其中的脂质成分为婴幼儿提供40-50%的能量、必需脂肪酸和脂溶性维生素,对婴幼儿的生长发育至关重要。乳脂质以脂肪球的形式分散在乳汁中,磷脂则主要存在乳脂肪球膜上,占母乳总脂质约1-2%,主要由鞘磷脂(SM),磷脂胆酰碱(PE),磷脂酰乙醇胺(PE),磷脂酰丝氨酸(P S)和磷脂酰肌醇(PI)这五种磷脂组成。虽然母乳中磷脂含量相对较少,但磷脂被认为是婴幼儿不可或缺的营养素。磷脂是大脑的主要脂质分子,与婴幼儿的大脑健康及学习认知能力密切相关,其可作为生物膜的主要骨架分子对神经元细胞增殖扩展提供物质基础,为神经元之间的信息传递提供胆碱,调节脂质代谢等。当母乳缺乏或不足时,婴幼儿配方奶粉(IF)是其最佳的替代品。由于磷脂主要位于脂肪球膜上,目前婴幼儿配方粉脂质配料主要考虑甘油三酯构型和脂肪酸的组成,对磷脂关注较少,导致IF中磷脂含量、种类及其脂肪酸组成和含量与母乳有较大差异。因此为了使IF的磷脂种类组成及营养价值方面与母乳接近,本课题基于国内外母乳中磷脂及其脂肪酸的组成和含量,筛选出母乳磷脂类似物的原料;通过无水乙醚去除乳磷脂(MPL)原料中甘油磷脂获得富含鞘磷脂(S M)的原料,并与其他磷脂原料进行复配,制备母乳磷脂类似物并对其进行评价;利用体内外消化吸收模型,系统研究母乳磷脂类似物消化吸收的特性及其对母乳结构脂体内外消化吸收特性的影响;通过动物实验研究母乳磷脂类似物对脂质代谢及学习认知功能的影响,为婴幼儿配方奶粉及其脂质配料提供了科学依据。主要研究结果如下:1、基于母乳磷脂及其脂肪酸的组成和含量,筛选出磷脂原料,利用相似度评价模型筛选出最佳母乳磷脂类似物配方。结果显示,基于磷脂及其脂肪酸组成和含量从12种磷脂原料中筛选出了3种作为原料,分别为大豆磷脂(SPL),葵花籽磷脂(SSPL)和牛乳磷脂浓缩物(MPL)。基于MPL利用无水乙醚富集SM,得到SM占比为69.47%的SMPL,并与SPL、SSPL和MPL复配母乳磷脂类似物。利用Lingo程序结合马氏距离(Mahalanobis distance)评价,筛选到国外母乳磷脂类似物(FPL)和国内磷脂类似物(CPL),马氏距离评分分别为73.29和72.58。FPL由SPL,MPL和SMPL这三种磷脂组成,比例分别为42.02%,21.80%和36.17%。CPL由15.82%的SPL,1.45%的SSPL,39.17%MPL和43.55的SMPL这四种磷脂组成。两者的PE和PC相对含量相近,但CPL的SM含量高于FPL,而FPL中PI和PS的总占比高于CPL。2、采用体外模拟消化婴儿消化模型和体内消化模型探究了不同母乳磷脂类似的消化吸收特性。体外消化结果显示,SPL、FPL和CPL都不被胃脂肪酶消化,只在小肠中被消化,最终CPL,FPL和SPL的水解度分别约为71.60%、56.71%和41.2%。且CPL粒径的减小率远高于SPL,分别约为77.36%和41.39%,FPL的粒径下降率为67.81%。另外,在最终消化产物中,CPL中磷脂相对含量的下降程度大于FPL和SPL。这些结果表明在体外消化模型中CPL比其他两种磷脂更容易被消化,而FPL比SPL更容易被消化。体内消化吸收结果显示,CP L在胃中以较快速率排空,其速度高于SPL和FPL,2小时内CPL在小肠内几乎完全消化,而SPL在3小时内几乎完全消化。CPL和SPL组血清脂肪酸在在0.5h就达到了峰值,而FPL组血清脂肪酸在1h后才开始上升。CPL两次达到的峰值总和远高于SPL和FPL。这些结果表明在体内CPL比SPL和FPL在体内更容易被消化和吸收。3、采用体外模拟消化婴儿消化模型和体内消化模型探究了不同母乳磷脂类似物对OPO消化吸收特性的影响。结果发现,添加磷脂提升了OPO脂质脂肪酸释放率,最终OPOC(OPO+CPL)的脂肪酸释放率约为65%,OPOF(OPO+FP L)和OPOS(OPO+SPL)的脂肪酸释放率接近,为60%左右,而OPO的脂肪酸释放率较低约为57%。四组乳液的电位都随消化的进行而下降至约-30 m V,并处于均匀稳定的状态。随着消化的进行,乳液中甘油三酯(TAG)的相对含量下降,游离脂肪酸的含量上升。OPOC和OPOF组中TAG含量远低于OPO组和OPOS组,含量分别为6.12%,16.87%,34.93%和38.76%。这些结果表明在体外消化模型中母乳磷脂类似物,尤其是CPL更能促进OPO的消化。体内消化吸收结果显示,0.5h前OPOF和OPOS的胃排空速率低于OPO,而OPOC的胃排空速率高于OPO,但是OPOF最终的胃排空速率较高。除了OPOS,其他三组乳液在2h时被完全消化,而OPOS在完全消化时间在3h之后。OPO在1h前脂肪酸含量与0h保持相对稳定,1h后含量才上升。OPOS组血清在2h前的波动都较小,在2h后才有较大波动,OPOF在1h达到峰值后,在之后的2h内脂肪酸含量都持续下降。OPOC组血清脂肪酸在3h前都呈逐渐上升趋势,3h之后才略有下降。这些结果表明在体内母乳磷脂类似物促进了OPO的消化吸收,CPL比FPL效果更明显。4、本章探究了母乳磷脂类似物对小鼠生长发育的影响,以及基于脂质组学技术探究了母乳磷脂类似物对脂质代谢的影响。结果表明,在饲养过程中,添加不同磷脂对小鼠的摄食量、体重和体长增加以及脏器指数没有显著影响。脂质组学研究结果表明,摄入磷脂对小鼠血清、肝脏、大脑脂质组成有显著影响。在血清中,对照组和SPL、FPL和CPL组间分别总共筛选出54种,41种和45种显著差异脂质,SPL组和FPL组、CPL组间分别总共筛选出18种和25种显著差异脂质,FPL和CPL组间总共筛选出4种显著差异脂质。这些差异脂质主要为甘油酯类(GL)和甘油磷脂类(GP)。CPL和FPL相对于SPL和对照组上调了GP的含量,其中包括具有重要生理活性的缩醛乙醇胺(PEt OH),CPL和FPL组的血清脂质组成差异较小。在肝脏组织中,筛选出的差异脂质较多。对照组和磷脂组(SPL、FPL和CPL)间分别总共筛选出114种,113种和102种显著差异脂质;在磷脂组中,主要下调的脂质为GL,上调的脂质为GP,包含多种PE t OH,且上调的磷脂所连接的脂肪酸主要为DHA、花生四烯酸(AA)等多不饱和脂肪酸。SPL组和母乳磷脂类似物组(FPL和CPL)间分别总共筛选出24种和33种显著差异脂质,母乳磷脂类似物组上调了肝脏中GL和GP的含量。两种母乳磷脂类似物组(FPL和CPL)总共筛选出20种显著差异脂质,CP L组主要上调了GP的含量,包括LPC,PE,PEt OH和PG等,下调了TG的含量。在大脑中,对照组和SPL、FPL和CPL组间分别总共筛选出15种,24种和26种显著差异脂质。SPL上调了Hex Cer以及LPE 18:1,PE 44:11,PC 40:6和PC 38:6的含量,FPL和CPL均主要上调了GP的含量,CPL组还下调了两种GL的含量。SPL组和FPL组、CPL组间分别总共筛选出15种和45种显著差异脂质,FPL上调了单半乳糖二酰甘油酯(MGDG)和几种GP的含量,而C PL上调了GP含量,还下调了Hex Cer和GL的含量。FPL和CPL组间总共筛选出11种显著差异脂质,且CPL组主要上调的脂质为GP的含量,下调的脂质为Hex Cer。这些结果表明磷脂的摄入改善了小鼠血清、肝脏和大脑脂质组成,其中CPL的效果更显著。5、基于水迷宫,旷场实验等行为学实验探究了母乳磷脂类似物对小鼠学习认知功能的影响。结果表明,CPL和FPL显著降低了小鼠逃避潜伏期的时间,延长了目标象限停留时间,在旷场实验中,CPL和FPL显著缩短了小鼠在中央区的活跃时间,小鼠趋避性增强。且这两组中尤其是CPL组小鼠海马CA1区成熟型树突棘密度显著增加,说明母乳磷脂类似物特别是CPL能提高小鼠学习认知功能。综上所述,本研究制备的母乳磷脂类似物CPL其相对FPL和SPL更容易被消化和吸收,且更有利于促进结构脂OPO的消化吸收。此外,CPL表现出优于FPL和SPL调节大脑和肝脏脂质代谢及增强小鼠耐力、趋避性及学习和认知能力的作用,为婴幼儿配方奶粉添加磷脂原料提供了科学依据。