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近年来，人们在探索原始卵泡的活化机制及降低卵泡体外培养过程中卵泡闭锁率的过程中发现，它可能受卵巢组织来源的许多生长因子的调控。许多生理代谢的启动过程都是受神经信号调节的，依此类推，卵巢的神经营养因子也可能是影响卵泡启动发育的重要因子，Hirshfield等研究大鼠胚胎，发现靠近卵巢门的原始卵泡最先启动生长发育，更支持了这一观点，因为卵巢门是胎鼠卵巢最先接受神经支配的部位，神经营养因子促进神经纤维的生长，原始卵泡在卵巢门暴露于神经纤维释放的神经递质中，神经递质如血管活性肠肽(VIP，vasoactive intestinal peptides)通过腺苷酸环化酶配对受体，诱导cAMP形成，cAMP增加KL基因的表达从而促进原始卵泡启动，因而推论神经营养因子如神经生长因子(NGF，nerve growth factor)、脑源性神经营养因子(BDNF，brain-derived neurotrophic factor)、神经营养因子-4(NT-4，neutrophin-4)可能参与了启动早期卵泡发育。
NGF是神经营养因子家族成员之一，1951年由Levi-montalcini在小鼠肉瘤细胞内发现。NGF广泛存在于动物体内，是一种蛋白质，含三种亚基α、β、γ，以α<,2> βγ<,2>五个亚基组成(分子量140000)，β亚单位是NGF分子的生物功能活性单位。
NGF通过TrKA受体促进卵巢间质细胞的增殖分化，Dissen等使用NGF基因缺失的小鼠模型发现新生小鼠卵巢间质细胞数目明显减少，使用抗PCNA (Droliferating cellular nuclear antigen，增殖细胞核抗原)及BrDU(bromodeoxyuridine，溴化脱氧尿嘧啶)检测，发现NGF基因缺失小鼠的间质细胞增殖率仅为对照组的一半；Lara等免疫中和了刚出生后小鼠体内的NGF，发现卵巢中卵泡成腔受阻，小鼠初情期推迟，发情周期紊乱，说明NGF参与了体内卵泡的发育。本实验采用卵巢皮质培养的方法进行原始卵泡的体外培养，为了促进原始卵泡生长，降低卵泡闭锁率，在培养体系中添加神经生长因子(NGF)、NGF中和抗体，研究NGF对人原始卵泡向初级卵泡转化、卵泡存活，卵泡雌孕激素分泌的作用。
材料与方法
1．组织来源
选取中山大学附属第二医院妇产科、广州市第二人民医院2006年10月至11月进行卵巢切除手术的女性患者21例作为研究对象，患者年龄31.71±5.20(21～38)岁，有规律月经、无放化疗史、半年内无激素服用史且卵巢囊肿直径<7cm，本实验得到本院生殖医学伦理委员会的批准并获患者知情同意。
2．实验方法
将在开腹或腹腔镜下获得的卵巢组织标本立即放置在冰上保存的HEPES-MEM培养液中，30分钟内送至实验室，在室温下用HEPES-MEM培养液冲洗两次后，移入装有该液体的培养皿中。在解剖显微镜下用外科手术刀片修剪卵巢标本并切除卵巢髓质，然后将卵巢皮质切成2mm×2mm×1mm的皮质片，将来自同一患者的皮质片随机分为5组：未培养组、NGF组、基础培养组、NGF抗体组、同型抗体对照组。将5组于37℃、5﹪C02、95﹪空气培养箱中培养15天。培养结束后取卵巢组织作病理切片，进行形态学观察、免疫组化(检测PCNA，用阳性单位PU定量表达免疫组织化学的显色反应程度)、凋亡分析，RT-PCR检测KLmRNA的表达变化，并检测所换培养液雌孕激素水平。
结果
1、NGF对卵泡生长发育的影响培养结束后，NGF组、基础培养组及抗NGF组平均有33.83﹪±31.73﹪、53.51﹪±39.41﹪、39.30±31.73﹪的卵泡处于原始阶段，显著低于未培养组原始卵泡所占比例82.16﹪±13.63﹪，P<0.01；NGF组原始卵泡比例低于基础培养组，P<0.01；NGF组与抗.NGF组间没有统计学差异。培养15天后，NGF组平均有54.14﹪±26.16﹪的卵泡是生长卵泡，明显高于未培养组、基础培养组及抗NGF组的生长卵泡比例14.63﹪±15.00﹪、23.39﹪±28.66﹪、31.44±32.24﹪，P<0.01。基础培养组与未培养组无统计学差异，P=0.53；抗NGF组与基础培养组，抗NGF组与未培养组均无差异，P分别为0.35，0.75。
未培养组中形态异常的卵泡占3.22﹪±7.48﹪，明显低于基础培养组、NGF组、抗NGF组的23.1﹪±30.94﹪、12.03﹪±11.75﹪、29.26±28.61﹪，P<0.05；NGF组异常卵泡比例低于抗NGF组异常卵泡，P<0.05；其余各组间异常卵泡比例差异无统计学意义。
抗NGF组、同型对照组培养15天后，平均有39.30﹪±31.73﹪、32.74﹪±29.33﹪的卵泡是原始卵泡，31.44﹪±32.24﹪及44.05﹪±40.45﹪的卵泡处在生长阶段，有29.26﹪±28.61﹪、23.21﹪±27.20﹪的异常卵泡，两组间均无统计学差异，P>0.05。
2、NGF对卵泡及卵巢问质细胞增殖的作用未培养组、基础培养组、NGF组、抗NGF组、同型抗体对照组卵巢组织中PCNA阳性卵泡比例分别为28.45﹪(33/116)、37.25﹪(19/51)、59.79﹪(58/97)、22.72﹪(5/22)、33.33﹪(10/30)，NGF组与未培养组及抗NGF组之间差异有统计学意义，P值均0.005；未培养组、基础培养组、NGF组、抗NGF组之间卵巢间质细胞PCNA的PU值分别为6.63±3.77、5.66±4.74、12.48±6.61、6.67±4.58， NGF组PU值显著高于未培养组、基础培养组、抗NGF组，P<0.05，其余各组间没有统计学差异，P>0.05。
3、NGF对卵泡及卵巢间质细胞凋亡的作用TUNEL实验后，各组未发现卵母细胞凋亡；未培养组未见间质细胞凋亡；NGF组、基础培养组、抗NGF组间质细胞凋亡指数分别是0.06±0.06、0.12±0.07和0.14±0.09，NGF组凋亡指数明显低于基础培养组、抗NGF组，P<0.01；基础培养组与抗NGF组间没有差异，P=0.49。抗NGF组与同型对照组(凋亡指数0.12±0.09)之间相比，差异没有统计学意义，P=0.41。
4、NGF对KLmRNA表达的影响本实验将10例患者基础培养组与NGF组培养后卵巢组织进行RT-PCR半定量法检测KLmRNA的表达情况。NGF组的KLmRNA表达0.91±0.30略高于基础培养组的0.83±0.32，差异没有统计学意义，P>0.05。
5、NGF对雌激素、孕激素水平的影响培养结束后，本实验测量了12例患者雌激素、孕激素，每份标本有五份换液进行激素测定。
7、NGF可以抑制体外培养卵巢组织的间质细胞凋亡，促进间质细胞的增殖，有利于卵泡的体外存活发育；
8、NGF促进体外培养的人卵巢组织雌激素的分泌。