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目的: 1.采用来曲唑灌胃方法构建雌性Wistar大鼠PCOS动物模型,并分析比较模型组与对照组的血清睾酮(T),雌二醇(E2)和黄体生成素(LH)水平变化,胰岛素抵抗相关的特征及卵巢的形态学改变。2.利用基因芯片的技术筛选两组之间差异表达的microRNAs,探讨其参与PCOS发生和发展过程中的可能机制。方法: 1、选取6周龄清洁级的雌性Wistar大鼠,随机分组为模型组和对照组,每组各20只。PCOS模型组:每日来曲唑1 mg/( kg·d)溶于1%的羧甲基纤维素(CMC)中,连续灌服21 d;对照组:不予处理,正常喂养。从用药的第10天开始每日进行阴道涂片至用药期结束,在最后一次应用来曲唑24h(并禁食12h)后,同时在处理对照组大鼠时,尽量控制其在动情间期。水合氯醛麻醉后切取卵巢,心脏取血,分离血清。全自动化学发光检测仪测定血清T,E2和LH;放射免疫学方法测定空腹血清胰岛素(FINS),血糖仪测定空腹血糖(FBG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);称重卵巢并测定大鼠体重;卵巢组织切片,HE染色,并观察其病理变化。2.从造模成功的PCOS模型组及正常对照组中各随机选取3只大鼠,10%的水合氯醛腹腔麻醉后,心脏取血后迅速取出双侧卵巢,称重后将其中的一个卵巢液氮冷冻固定保存,送往北京博奥生物有限公司应用最新版本15.0的LC-science microRNAs表达谱微阵列芯片进行筛选microRNAs。结果: 1.阴道涂片结果显示模型组无明显的动情周期的改变,大多处于动情间期,而对照组则有明显的动情周期的变化。模型组卵巢切片HE染色显示:卵巢有较多的囊状扩张卵泡,而黄体及发育阶段卵泡数目明显减少,卵泡内卵母细胞和放射冠消失,颗粒细胞层数减少或消失,卵泡膜细胞及间质细胞增生。对照组可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,卵泡内颗粒细胞呈多层,多为8-9层。2.与对照组比较,PCOS模型组血清T显著高于对照组(P<0.01),而血清FBG,FINS和HOMA1-IR无统计学差异(均为P>0.05),两组大鼠体重变化无统计学差异(P>0.05),去除体重影响后PCOS模型组大鼠卵巢重量显著大于对照组(P<0.05)。3.基因芯片结果表明,对照组与模型组两组的卵巢之间大量有差异表达的microRNAs。与对照组比较,在模型组表达明显增多有57个microRNAs(P<0.01)其中有23个信号值较高差异较明显,34个是信号值低于500但是也有差异的;表达明显减少的有43个microRNAs(P<0.01),其中20个信号值较高差异显著,23个是信号值低于500差异也显著的,包括差异较大、且有证实意义的、与细胞增殖凋亡相关的mir-16, mir-21, mir-24, mir-31, mir-98, mir-125b, mir-143, mir-145, mir-150等。结论:1.来曲唑诱导雌性Wistar大鼠PCOS动物模型的卵巢病理改变及血内分泌改变与PCOS病人相似。阴道图片也显示出模型组无明显的排卵周期的变化,这些改变类似于PCOS患者的病理生理变化,但是此种模型无胰岛素抵抗相关的改变征象。可以作为研究非胰岛素抵抗型PCOS的动物模型。2.模型组与正常组之间存在大量表达差异的microRNAs,说明microRNAs可能在PCOS疾病的发生发展中有着重要的作用,可以为研究PCOS疾病的病理机制提供新的方向和线索,及进一步验证相关microRNAs有重要的参考价值。目的:结合文献报道与基因芯片筛选结果,选择mir-21和mir-320进行验证,观察它们在PCOS模型组与正常组之间的表达差异,并探讨其在PCOS疾病的发生发展中的可能机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测两组大鼠卵巢中mir-21和mir-320的表达水平,选择snRNA U6为内参照miRNA,每份标本均设2个平行复孔和1个阴性对照。结果:荧光定量PCR结果分析显示模型组的mir-21的表达量相对对照组的表达量约是0.48,而mir-320在两组之间的含量相当,无明显的差别。结论:从real-timePCR验证的结果我们得知,mir-21和mir-320在两组中的含量变化与基因芯片结果相符合。因此可以推测PCOS患者中卵泡的发育成熟障碍可能与mir-21的含量减少有关。Mir-320是与胰岛素抵抗发病有关的一种microRNA,而在我们的结果中证明了其在两组中的含量是相当的,所以进一步证明了来曲唑诱导的PCOS动物模型是没有胰岛素抵抗特点的,这点是与雄激素造模法的不同之处。