五味子木脂素类成分分析方法的建立及大鼠体内药代动力学研究

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五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,习称“北五味子”,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。不同产地的五味子在木脂素类成分含量及类型方面存在显著差异,造成五味子药材质量不稳定,直接影响临床疗效。本实验以不同产地五味子为研究对象,采用HPLC和UHPLC-Q-TOF/MS法同时测定不同五味子中木脂素类成分的含量,并应用UHPLC-MS/MS技术对五味子提取物中木脂素类成分在大鼠体内的药代动力学进行研究,使五味子药材的质量控制更加完善并为其临床进一步研究提供依据。  本实验主要包括三部分:  1.建立HPLC-UV法同时测定五味子药材中9种木脂素类成分含量的方法。以木脂素类成分的总含量为指标利用正交实验法优选五味子的最佳提取方法,并建立HPLC法用于五味子中五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、Gomisin B、Gomisin D、Gomisin G、Gomisin H9种木脂素成分的含量测定方法,分别对15个不同产地五味子药材进行分析比较。结果表明不同产地各成分存在差异,含量测定方法可靠、方便准确,可以用于五味子木脂素类成分的测定。  2.UHPLC-Q-TOF/MS法同时快速对五味子中15种木脂素类成分的定性及定量研究。以乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,采用正离子模式,在10 min内被测成分有较好分离并测定,同时利用飞行时间质谱的高分辨优势及四极杆-飞行时间串联质谱的多级碎片测定性能对各被测成分进行定性研究。结果建立的UHPLC-Q-TOF/MS法更快速、灵敏、准确,可用于五味子药材的定性及定量研究。  3.应用UHPLC-MS/MS法研究五味子提取物中木脂素类成分药代动力学特征。以Gomisin D、Gomisin E、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素为指标,采用Agilent Poroshell120 EC-C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,电喷雾电离源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式,研究并计算大鼠灌胃给予五味子提取物后在血浆中的药动学参数。结果6种成分校正曲线线性关系良好,日内、日间精密度符合要求,建立的方法可用于五味子临床前的进一步研究。
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