目的转移性结直肠癌（metastatic colorectal cancer,m CRC）患者常规需要接受靶向治疗,然而以西妥昔单抗为代表的抗表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）制剂在临床应用方面存在局限性:携带KRAS和BRAF突变的肿瘤对西妥昔单抗原发耐药,符合适应证的患者长期应用面临继发耐药问题。近年发现携带KRAS、BRAF突变肿瘤的生长、增殖对SHP2仍有依赖性,但靶向SHP2对肿瘤生长的抑制并不显著。研究发现SHP2抑制剂处理多种CRC细胞系均观察到Eph A2磷酸化水平的反馈性升高,提示Eph A2的反馈性激活可能是降低细胞对SHP2抑制剂敏感性的原因。我们推测同时抑制SHP2和Eph A2对CRC能产生更强的作用。本课题针对联合阻断SHP2与Eph A2对CRC协同抑制作用的现象及机制进行了以下研究。⑴抑制SHP2引起Eph A2反馈性激活的作用及机制⑵联合阻断SHP2与Eph A2协同抑制CRC的下游机制研究⑶分析SHP2与Eph A2下游分子AURKA在CRC组织样本中的表达模式和临床意义方法本课题研究方法如下:（1）选取6种携带KRAS或BRAF突变的CRC细胞系,SHP2抑制剂RMC-4550（10μM）处理,取多个时间点通过免疫印迹实验动态观察p Eph A2（S897）及其可能的直接上游分子AKT、ERK、RSK1的活性变化趋势。使用ERK、AKT抑制剂处理细胞系验证p Eph A2（S897）上游信号。Eph A2抑制剂ALW-Ⅱ-41-27处理KRAS、BRAF基因不同状态的CRC细胞系通过CCK-8增殖实验检测是否存在剂量反应。SHP2与Eph A2抑制剂单独或同时处理CRC细胞系,通过CCK-8及克隆形成实验验证是否存在协同效应。（2）SHP2与Eph A2抑制剂单独或同时处理CRC细胞系12、24h,设置对照,收集蛋白样品,免疫印迹实验检测不同处理组ERK、AKT活性变化。对转录组数据集GSE120208进行GO和GSEA富集分析,找出敲低EPHA2引起改变的信号通路,得出Eph A2可能影响的通路及下游分子。检测上述样品各处理组AURKA和TPX2的变化。通过CCK-8及克隆形成实验证实SHP2和AURKA抑制剂对CRC的协同抑制作用。（3）对福尔马林固定石蜡包埋（formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE）的结直肠癌组织切片进行免疫组化（immunohistochemistry,IHC）染色,检测样本中p SHP2（Y542）及AURKA表达水平,根据IHC评分将样本分组,分析p SHP2（Y542）和AURKA表达水平与患者预后的关联。结果（1）通过抑制剂阻断SHP2后CRC细胞出现ERK-RSK1-Eph A2（S897）轴的先抑制后反馈性激活,提示SHP2抑制剂效果不强的可能原因;通过ERK和AKT抑制剂进一步证实CRC中Eph A2的非配体依赖激活受ERK-RSK1信号调节。靶向Eph A2（S897）对CRC的增殖有显著抑制作用且细胞的敏感性不受KRAS、BRAF突变影响。在短期（CCK-8）和长期（克隆形成）增殖实验中,联合抑制SHP2与Eph A2对CRC具有协同效应。（2）单一抑制Eph A2对CRC细胞内AKT活性即有明显影响,联合抑制SHP2使AKT活性进一步降低。分析敲低EPHA2的胰腺癌转录组数据发现敲低EPHA2后一同下调的通路主要与细胞周期相关,结合文献推测Eph A2通过AURKA影响AKT活性。实验证实Eph A2抑制剂处理引起TPX2和AURKA转录水平下降。联合阻断SHP2和Eph A2（S897）显著抑制AKT且促进细胞凋亡。SHP2和AURKA联合阻断对CRC同样具有协同抑制效应。（3）对703例CRC组织样本IHC结果的分析发现p SHP2（Y542）和AURKA表达水平与患者原发肿瘤部位、临床分期、组织类型、血清CEA、CA199无显著关联,肿瘤组织高表达p SHP2（Y542）或AURKA的患者预后均劣于低表达组,二者同时高表达患者例数较少但预后明显更差。结论（1）靶向抑制SHP2引起ERK-RSK1-Eph A2（S897）反馈性激活,联合阻断SHP2和Eph A2（S897）对KRAS、BRAF突变型CRC有协同抑制作用。（2）抑制SHP2和Eph A2（S897）分别通过RTKs-PI3K和TPX2-AURKA两种途径协同抑制AKT活性,并激活caspase3和PARP裂解,启动细胞凋亡。（3）p SHP2和AURKA高表达均提示预后不良,二者共同高表达者相比单一高表达预后更差。