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目的: 探讨双氯芬酸对热化疗促结直肠癌细胞凋亡的增敏作用及分子机制。 方法: 1.应用MTS法测定细胞增殖抑制率,计算半数抑制率浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50),确定顺铂和双氯芬酸的工作浓度; 2.将实验分为空白对照组、热化疗组和增敏组,再次应用MTS法测定细胞增殖抑制率,观察双氯芬酸是否能够增强热化疗对人结直肠癌HC T116细胞增殖的抑制作用; 3.应用葡萄糖测定试剂盒和乳酸测定试剂盒分别检测细胞培养液中残余葡萄糖含量及乳酸生成量,RT-PCR和Western Blot检测各组HCT116细胞膜上葡萄糖转运体1(glucose transporter1,GLUT1)mRNA和蛋白的表达,观察双氯芬酸对HCT116细胞能量代谢的影响; 4.应用流式细胞技术结合Annexin V-FITC/PI双染法检测各组HCT116细胞的凋亡率,RT-PCR和Western Blot检测各组HCT116细胞凋亡相关基因mRN A和蛋白的表达,观察Ba x/Bc l-2比值的变化。 5.数据分析采用SPSS13.0统计软件进行处理。计量资料用均数±标准差(mea n±SD)表示,两样本均数的比较以t检验进行统计学分析。多组间均数的比较,若满足方差齐性则以单因素方差分析(one-way ANOVA)进行比较,组间两两比较采用LSD’s法;若方差不齐,则采用we lch检验,组间两两比较采用Dunnett’s法进行统计学分析,P﹤0.05表示差异有统计学意义。 结果: 1.顺铂和双氯芬酸在37℃和43℃条件下抑制HCT116细胞增殖的IC50分别为9.4μg/mL和5.2μg/mL、0.23 mM和0.12 mM。 2.双氯芬酸能够增强热化疗对HCT116细胞增殖的抑制作用。 3.经流式细胞仪检测发现,增敏组的细胞凋亡率显著高于热化疗组(P<0.05),结果表明双氯芬酸可以增强热化疗对HCT116细胞的促凋亡作用。 4.与热化疗组相比,增敏组HCT116细胞中促凋亡基因Bax表达显著上调,而抗凋亡基因Bc l-2表达显著下调,Ba x/Bc l-2比值增大。 5.双氯芬酸通过下调HCT116细胞膜中GLUT1的表达,抑制其从培养液中摄取葡萄糖,阻碍有氧糖酵解过程,降低乳酸的生成,从而抑制了HCT116细胞的能量代谢。 结论: 双氯芬酸能够影响结直肠癌HCT116细胞的能量代谢,进而增强热化疗促肿瘤细胞凋亡的敏感性。