目的:本研究旨在制备一种靶向结合人表皮生长因子受体2（HER2）同时载有单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的阳离子纳米靶向超声造影剂,并用胍基化的聚氨基胺类聚合物保护HSV-TK基因。对该载基因的纳米靶向超声造影剂的各项基本特性进行表征,并探究其在体外对NCI-N87胃癌细胞的靶向能力及其体外超声显影效果。方法:首先采用薄膜水化法制备阳离子脂质体,将二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二硬酯酰磷脂酰乙醇胺-生物素（DSPE-PEG（2000）-Biotin）、二硬酯酰磷脂酰乙醇胺-氨基（DSPE-PEG（2000）-NH2）按照摩尔比8:1:1称取10mg溶于氯仿中,通过旋转蒸发仪蒸发成脂质膜,加入PBS水化后,然后向其逐滴加入全氟己烷,全程冰浴条件下通过超声细胞破碎仪处理后制备得到阳离子纳米超声造影剂。采用生物素-链霉亲和素桥联法,将生物素化的HER2抗体连于阳离子纳米超声造影剂表面,即得到HER2靶向的阳离子脂质纳米超声造影剂（HCN）。再通过静电吸附,将HSV-TK基因结合到纳米粒上,用AGM-CBA聚合物对其进行保护,最终制得HER2靶向阳离子脂质载HSV-TK基因并具核定位效应的纳米超声造影剂（HCPAN）。采用马尔文激光粒度仪和透射电镜对制备的HCPAN的粒径、电位、外观形态等进行表征。通过激光共聚焦显微镜及流式细胞仪考察其对NCI-N87胃癌细胞的靶向结合能力及核定位效应。最后通过彩色超声诊断仪观察琼脂糖凝胶模型中的HCPAN的体外超声显影效果。结果:马尔文激光粒度仪测得HCPAN平均粒径为441.1±128.3 nm,多分散系数为0.249,粒径大小均一;Zeta电位为28.1±5.26 m V。在透射电子显微镜下观察HCPAN呈相对规则圆整的球形。激光共聚焦显微镜观察到HSV-TK基因质粒及HER2抗体同时负载到HCPAN表面,表现为红色荧光的质粒与绿色荧光的抗HER2抗体叠加呈现黄色荧光。质粒载量实验结果显示,5×10~7个HCN纳米粒约能结合3.0μg HSV-TK质粒。琼脂糖凝胶电泳显示,HCPAN在体外具有一定的抗核酸酶降解的能力。流式细胞仪结果显示,HCPAN与NCI-N87胃癌细胞的结合率约为87.8%。激光共聚焦显微镜显示经红色荧光标记的HCPAN纳米粒能靶向聚集在NCI-N87胃癌细胞周围。另外,HCPAN经LIFU辐照转染NCI-N87胃癌细胞后,经红色荧光染料Cy5标记的HSV-TK基因质粒聚集在细胞核周围,展现出优良的核定位效应。体外超声显影实验显示,随着LIFU辐照时间的延长,琼脂糖凝胶模型中的HCPAN纳米粒在B-mode和CEUS-mode均显示回声强度先增强后减弱的趋势,表现出良好的声学响应性。结论:本实验成功制备出一种HER2靶向阳离子脂质载HSV-TK基因并具核定位效应的纳米超声造影剂,其粒径均一,能保护HSV-TK基因质粒不被核酸酶降解,具有优良的核定位效应体,能在体外特异性靶向结合NCI-N87胃癌细胞,并具有良好的声学响应性,能为后续细胞转染实验以及体内肿瘤靶向超声造影奠定了一定的基础。