【摘 要】
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目的:检测锌铁转运蛋白ZIP14在人肾小管上皮细胞HK-2上皮间质转化过程中的表达变化,拟探讨ZIP14的迁移过程及抑制肾小管上皮纤维化进程的可能性。研究方法:1、使用TGF-β1诱导肾小管上皮细胞HK-2制备纤维化细胞模型。在10ng/ml TGF-β1不同诱导时间的HK-2中用q RT-PCR、Western blot方法检测ZIP14表达水平。同时,在同上细胞分组中用IF方法检测纤维化相关蛋
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目的:检测锌铁转运蛋白ZIP14在人肾小管上皮细胞HK-2上皮间质转化过程中的表达变化,拟探讨ZIP14的迁移过程及抑制肾小管上皮纤维化进程的可能性。研究方法:1、使用TGF-β1诱导肾小管上皮细胞HK-2制备纤维化细胞模型。在10ng/ml TGF-β1不同诱导时间的HK-2中用q RT-PCR、Western blot方法检测ZIP14表达水平。同时,在同上细胞分组中用IF方法检测纤维化相关蛋白α-SMA、E-cadherin、Vimentin表达水平及定位。2、在上述纤维化细胞模型中,使用细胞膜与细胞质蛋白抽提试剂盒,用Western blot方法分别检测ZIP14在不同诱导时间的HK-2细胞膜上和细胞质内表达水平。3、选择48h诱导组为研究对象,转染ZIP14过表达慢病毒载体,同时用q RT-PCR方法验证ZIP14过表达效率。设立正常HK-2、TGF-β1诱导48h、空病毒+TGF-β1诱导48h、过表达ZIP14RNA+TGF-β1诱导48h等四组细胞,分别在细胞质中用Western blot方法检测α-SMA、E-cadherin、Vimentin表达水平,并用同样方法在细胞膜上检测ZIP14表达水平。最后,在上述细胞分组中用ELISA方法检测细胞炎性因子IL-6和TNF-α表达水平。结果:1、与正常HK-2组相比,TGF-β1诱导48h组中ZIP14m RNA和ZIP14表达水平下降;同时α-SMA、vimentin上调,E-cadherin下调,具有统计学意义（P＜0.05）。2、与正常HK-2组相比,随着TGF-β1诱导时间延长,细胞质内ZIP14蛋白表达逐渐下调,细胞膜上ZIP14蛋白表达逐渐上调,具有统计学意义（P＜0.05）。3、与空病毒+TGF-β1诱导48h组相比,过表达ZIP14RNA+TGF-β1诱导48h组α-SMA、vimentin及ZIP14膜蛋白上调,E-cadherin下调,具有统计学意义（P＜0.05）。同时ELISA结果显示:与正常HK-2组相比,TGF-β1诱导48h组IL-6、TNF-α表达上调,具有统计学意义（P＜0.05）;与空病毒+TGF-β1诱导48h组相比,过表达ZIP14RNA+TGF-β1诱导48h组IL-6、TNF-α表达上调,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞HK-2纤维化过程中,ZIP14总蛋白表达下调,但ZIP14在HK-2细胞膜上表达上调。HK-2细胞膜上锌铁转运蛋白ZIP14表达上调后,进一步促进肾小管上皮细胞纤维化进程,同时促进细胞炎性因子表达增加。
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