毛细管阵列电泳-掩模式激光诱导荧光检测器的研制与应用研究

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快速、高效、高通量、低耗能、环保的分析手段一直是人们追求的目标。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)作为一种高精准分析手段,因其具有高效性、快速、微量、多模式、经济等优势,得到迅速发展。随着科学研究不断深入,出现的高通量毛细管阵列电泳(Array Capillary Electrophoresis,CAE)得到青睐;因其除了具有单通道CE优点外,还具有多个样品同时分析,快速确定样品的种类、结构、特性等优点。但是目前CAE尚存在亟需改善的之处,比如通道信号定位分类困难、通道之间信号彼此干扰、采样率低等问题。鉴于此,本文研制了一种新型掩模式激光诱导荧光检测器的CAE,并对其性能进行了验证评估;最后采用新研制的CAE检测器,成功实现了一些实际样品的分析应用。本论文包含以下四个主要部分:1.绪论:简单回顾与简述了CAE的研究进展、原理、电泳分离模式等。主要介绍了CAE的分类;每种类型的CAE的特点。目前,主要是根据检测器不同进行分类,其中主要有紫外-可见吸收检测器的CAE、时间分辨荧光检测器的CAE、激光诱导荧光检测器的CAE等;并且针对CAE在各个领域的应用研究进展进行阐述。根据各类CAE的检测方式、检测原理、定位通道的方式等,进行综述、归纳总结;同时,基于CAE的应用状况,抓住优点,扬长避短;根据实际样品的分析需求,提出了本文的研究意义。2.设计并研制出一个结构简约、通道信号定位分类简单、成本较低、灵敏度较高的CAE-掩模式激光诱导荧光检测器。直接使用高速直流电机,不需要配备额外通道定位机械装置,通过采用软件定点提取有效信号进行绘图;掩模与凸透镜相结合,扫描通道,实现通道信号调制。这样可以减少光学元件旋转,提高系统稳定性;从而可以提高采样率。以光纤代替传统庞大光学元件来传送光学信号,简化光学路系统;同时,使用光纤多方向收集荧光,有效提高灵敏度。最后,采用两种不同电泳模式,对设计的新检测器进行性能测试。结果表明,该检测器设计新颖、结构巧妙、阵列通道独立运行的特点,互不干扰。一个光电倍增管(Photomultiplier Tube,PMT)能够同时对多通道进行信号采集;实现灵敏分析,对罗丹明6G检测限(limit of detection,LOD)为20.00 ng/mL。3.固相萃取-毛细管电泳高灵敏同时测定蒽醌与黄酮类化合物。基于研制的CAE的优势,快速筛选优化出同时分离芦丁、大黄素、槲皮素、1,8-二羟基蒽醌的最佳电泳分离条件。选取环境友好型的甲壳素,进行简单处理后作为固相萃取材料,填充于滤头,对复杂样品中的芦丁、大黄素、槲皮素、1,8-二羟基蒽醌进行萃取。优化萃取条件,在最佳固相萃取条件下,该方法简单、快速、灵敏度高,用于蜂蜜样品分析,分析效果良好。实验表明,LOD为3.00~200.0 ng/mL,回收率为90.0~107.0%,精密度RSD为1.8~8.3%。4.双波长激发光源-毛细管阵列电泳同时分析姜黄素与阿霉素。在已研制的掩模式激光诱导荧光检测器CAE的基础上,对于光路进行简单调整,构建了一个由445 nm和488 nm组成的双波长激光诱导荧光(Laser-induced Fluorescence,LIF)光路。选用罗丹明6G为内标,引入曲拉通X-100和十六烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate,SDS)组成的混合胶束,不仅增强了姜黄素的荧光,还提高分离度,改善了峰型。通过考察优化,得到最佳电泳分离条件由20 mM曲拉通X-100-5 mM SDS-30%(v/v)甲醇-10 mM硼砂组成(pH 9.00)。建立的方法应用于人尿样中的盐酸阿霉素和姜黄素的分析;检测限分别为4.00和10.00ng/mL,回收率为94.9~109.3%,结果令人满意。
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