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白细胞介素9（interleukin-9,IL-9）是一种T细胞生长因子,来源于TH2、TH9、TH17、调节性T细胞（Treg）等T辅助细胞亚群,但主要由辅助性T细胞（TH9）分泌。IL-9在超敏反应、自身免疫性疾病、抗寄生虫感染和肿瘤免疫等疾病发生发展中具有重要作用,但IL-9对骨代谢的影响未见报道。有研究发现IL-9的缺失抑制了Ⅱ型先天性免疫细胞（ILC2）的增殖,同时抑制调节性T细胞（Treg）的激活,导致血清转移性关节炎（SIA）小鼠出现关节软骨过度破坏,加剧骨质丢失;而过表达IL-9后可以促进了 ILC2的增殖和Treg细胞的激活,减轻了炎症反应,同时减少了骨量丢失。本研究旨在探讨IL-9缺失后对小鼠骨量变化的影响,并对其机制进行初步探究,为寻找潜在的疾病干预靶点提供依据,为骨质破坏相关疾病的诊疗提供新的思路和策略,具有重要的科学意义和临床价值。目的:探究IL-9对骨代谢的影响及其机制。方法:收集不同年龄阶段的（2月龄、3月龄、6月龄、12月龄和18月龄）野生型小鼠（WT）和IL-9敲基因小鼠（IL-9-/-）血清、脾脏和骨组织。micro-CT扫描股骨分析相关骨量参数。ELISA检测血清中骨钙素（OC/BGP）和Ⅰ型胶原交联羧基端肽（CTX）的含量。流式细胞术分析脾脏中的免疫细胞和骨髓中的免疫细胞、成骨前体细胞、破骨前体细胞比例。组织形态学染色观察骨髓腔中骨量情况。钙黄绿素双标实验检测动态骨形成情况。酸银法钙盐染色（Von Kossa）实验检测骨矿化能力。克隆形成单位（Colony-Forming Units,CFU-F）染色、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）染色和茜素红染色实验检测骨髓间充质干细胞（Bonemarrowmesenchymal stem cells,BMMSCs）的数量及成骨分化情况。分离WT小鼠和IL-9-/-小鼠全骨髓细胞培养BMMSCs,传代后流式检测干细胞表型后备用。CCK8检测BMMSCs的增殖情况。BMMSCs经成骨诱导7天进行ALP染色和实时荧光定量 PCR（Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测成骨相关基因。BMMSCs经成骨诱导14天进行茜素红染色。BMMSCs经成骨诱导3天Western blot检测JAK/STAT信号通路和成骨相关蛋白表达。分离WT小鼠和IL-9-/-小鼠全骨髓细胞培养骨髓来源的单核/巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophage,BMMs）,加入适量的 M-CSF 和 RANKL,qRT-PCR 检测BMMs破骨相关基因表达情况。TRAP染色和骨架染色检测BMMs破骨向分化情况。骨吸收实验检测BMMs骨吸收能力。结果:micro-CT分析显示,与WT小鼠相比,IL-9-/-小鼠骨形态相关参数显著降低。ELISA结果显示,与WT小鼠血清相比,IL-9-/-小鼠血清中OC/BGP含量显著降低,但是两者CTX含量没有明显差异。流式细胞术结果显示,与WT小鼠相比,IL-9-/-小鼠脾脏中Treg细胞显著降低,IL-9-/-小鼠骨髓中BMMSCs细胞比例显著升高,但是成骨前体细胞比例显著下降。股骨H＆E染色、Col1免疫组化、Masson染色和TRAP染色结果显示,与WT小鼠相比,IL-9-/-小鼠骨髓腔中骨小梁减少,Coll阳性细胞数目减少,胶原形成减少,TRAP阳性细胞数目也减少。钙黄绿素双标实验显示,与WT小鼠相比,IL-9-/-小鼠骨髓腔中的小梁骨数目显著较少,且骨形成速度较慢。von Kossa显示,与WT小鼠相比,IL-9-/-小鼠股骨中钙沉积颜色较浅;同时,IL-9-/-小鼠股骨中钙沉积阳性细胞数目也显著低于WT小鼠。CFU-F染色结果显示,与WT小鼠BMMSCs相比,IL-9-/-小鼠BMMSCs克隆数目较多,但其ALP阳性细胞和茜素红染色阳性细胞数量较少。WT小鼠和IL-9-/-小鼠BMMSC具有干细胞形态,CD29阳性表达率达到90%以上,CD34、CD45等表达率在10%左右。CCK-8检测其增殖没有明显差异。ALP染色和茜素红染色及量化结果表明IL-9-/-小鼠BMMSCs成骨能力减弱,而外源性加入IL-9可以改善IL-9-/-小鼠BMMSCs成骨能力。qRT-PCR结果显示IL-9-/-小鼠BMMSCs中成骨相关基因骨钙素（Osteocalcin OCN）、骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）、1型胶原（Recombinant Collagen Type Ⅰ,Col1）的表达能力较弱,同样加入IL-9以后可以促进其成骨能力。WB结果显示,与WT小鼠BMMSCs相比,IL-9-/-小鼠BMMSCs成骨相关蛋白表达较低,且STAT3磷酸化水平也较低;加入外源性IL-9后可以同时促进WT小鼠IL-9-/-小鼠BMMSCs成骨相关蛋白的表达,同时促进STAT3磷酸化水平。IL-9-/-小鼠BMMs细胞TRAP、NFATC1、OSCAR和DC-STAMP等破骨相关基因显著低于WT小鼠,IL-9-/-小鼠BMMs细胞TRAP染色阳性细胞数目显著低于WT小鼠。加入外源性IL-9可以促进WT小鼠BMMs细胞破骨相关基因的表达,促进TRAP染色阳性细胞数目;同时也可以促进IL-9-/-小鼠BMMs破骨分化能力。骨吸收实验结果显示加入外源性IL-9可以促进BMMs向破骨细胞分化,增强其骨吸收能力。结论:IL-9缺失致小鼠BMMSCs骨形成能力显著降低;同时其BMMs骨吸收能力降低。但骨形成能力下降程度大于骨吸收下降程度,导致小鼠骨量降低。