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研究目的：1.通过GEO数据库探明非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic Steatohepatitis,NASH）患者血浆外泌体中miR-146a-5p的表达水平。2.通过蛋氨酸胆碱缺乏（Methionine-and choline deficient,MCD）饮食构建NASH小鼠模型,探明NASH小鼠血浆外泌体中miR-146a-5p的表达水平。3.通过超速离心法制备高表达miR-146a-5p的外泌体,在细胞水平探讨其对巨噬细胞M1极化的作用,为进一步体内实验治疗NASH提供理论基础。研究方法：1.通过GEO数据库检索与课题相关的数据集;使用“Analyze with GEO2R”对系列数据进行在线分析;获取该基因所有样品的具体数值后通过“Graph Pad prism 9”分析数据。2.将7周龄小鼠随机分成2组（6只/组）,分别给予正常饮食和MCD饮食5周,每周记录小鼠体重;实验周期结束后,检测两组小鼠肝组织内甘油三酯（triglycerides,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）含量和CD80的表达情况;检测小鼠空腹血浆谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,ALT）和IL-6的含量;解剖小鼠,取出肝脏后,拍照并观察两组小鼠肝脏形态并称重,取少许肝组织做病理切片;提取小鼠血浆外泌体后,检测两组小鼠血浆外泌体中miR-146a-5p的表达水平。最后通过原代细胞提取,进一步明确NASH小鼠肝细胞和肝巨噬细胞内miR-146a-5p的表达情况。3.将50 nmol/L miR-146a-5p mimic或阴性对照转染至诱导分化的巨噬细胞内,转染48h后收集细胞,通过western blot检测巨噬细胞内M1型巨噬细胞的标记蛋白CD86的表达情况;从巨噬细胞中分离总RNA,将m RNA逆转录为c DNA,以GAPDH为内参,定量CD86的表达;通过免疫荧光标记CD86,进一步明确miR-146a-5p在M1极化过程中发挥的作用。4.分别将50 nmol/L miR-146a-5p mimic或阴性对照转染至Hep G2细胞中,转染48 h后收集细胞培养基上清,通过超速离心的方法制备高表达miR-146a-5p的外泌体和对照组外泌体。通过透射电子显微镜镜观察外泌体的形态;通过western blot检测外泌体标记蛋白CD63的表达情况;从外泌体中分离总RNA,将miRNA逆转录为c DNA,以U6为内参,定量miR-146a-5p的表达。5.将高表达miR-146a-5p的外泌体或对照组外泌体加入至巨噬细胞中共孵育48小时;以U6为内参,定量巨噬细胞内miR-146a-5p的表达;以18S为内参,定量巨噬细胞内MCP-1、TNF-α、IL-6的表达;通过western blot检测巨噬细胞内CD86的表达情况;通过生物信息学预测靶基因并进行相关机制研究。研究结果：1.NASH患者及小鼠血浆外泌体中miR-146a-5p表达下调;2.NASH组血浆外泌体中miR-146a-5p与血浆中IL-6的含量呈负相关;NASH组小鼠肝原代细胞和肝巨噬细胞内miR-146a-5p的表达均明显降低;3.在巨噬细胞内过表达miR-146a-5p在蛋白水平和m RNA水平降低M1型巨噬细胞标记蛋白CD86的表达;并且可以在一定程度上逆转LPS导致的M1型巨噬细胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放。4.高表达miR-146a-5p的外泌体与巨噬细胞共孵育48h后,巨噬细胞内miR-146a-5p的表达明显升高;高表达miR-146a-5p的外泌体可以降低CD86的表达并减少M1型巨噬细胞促炎因子MCP-1、TNF-α、IL-6的释放;高表达miR-146a-5p的外泌体可以通过靶向作用于CD80来抑制巨噬细胞M1极化。研究结论：NASH患者和小鼠血浆外泌体中miR-146a-5p表达明显下调;NASH组小鼠原代肝细胞和肝巨噬细胞内miR-146a-5p的表达均明显降低。细胞实验研究表明,在巨噬细胞内过表达miR-146a-5p可以抑制M1极化;制备高表达miR-146a-5p的外泌体与巨噬细胞体外共孵育后可以通过靶向作用于CD80来抑制巨噬细胞M1极化,并减少促炎因子MCP-1、TNF-α、IL-6的释放。