目的:2型糖尿病（T2DM）患者伴发代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）发生率高达49%～62%。T2DM伴有MAFLD患者发生糖尿病并发症和死亡风险明显增高,此类患者肝脏特异性并发症可进展为肝硬化、肝衰竭和肝癌,严重威胁人类健康。虽然T2DM合并MAFLD的发病机制目前仍不明确,但越来越多的动物模型和糖尿病患者证实其疾病的进展与肝脏氧化应激、炎症反应、脂质的蓄积以及体内血糖异常等有关。由于肝细胞的再生和修复能力有限,且目前临床上T2DM合并MAFLD的主要治疗方法为改变饮食及生活方式,调控血糖,维生素E、熊去氧胆酸、二甲双胍改善胰岛素抗等,此外降脂类药物治疗T2DM合并MAFLD仍存在争议。目前为止仍无特效治疗T2DM合并MAFLD的药物,因此发掘治疗T2DM合并MAFLD药物并探讨其作用机制亟待解决。本实验在C57BL/6J小鼠体内及小鼠肝脏中研究异荭草素（ISO）对T2DM合并MAFLD小鼠肝脏的保护作用,并进一步探讨其保护作用机制。方法:SPF级雄性C57BL/6J小鼠72只随机分出正常对照组12只,其余小鼠使用含60%高脂饲料喂养4周,然后连续腹腔注射小剂量(30mg·kg-1)链脲佐菌素（STZ）5次,1周之后测小鼠随机血糖大于16.7mmol/l为小鼠2型糖尿病模型造模成功。继续应用60%高脂饲料喂养小鼠4周后,随机抽取小鼠肝脏做HE染色可见肝组织有明显的脂肪空泡,油红O染色可见肝组织有明显红色脂滴沉积,小鼠MAFLD造模成功。将造模成功的T2DM合并MAFLD的小鼠随机分为模型对照组（T2DM合并MAFLD小鼠）、胰岛素对照组（应用甘精胰岛素处理的小鼠）、异荭草素（ISO）处理组:异荭草素低剂量组(10 mg·kg-1)、异荭草素中剂量组(20 mg·kg-1)、异荭草素高剂量组(40 mg·kg-1)。每组小鼠12只,胰岛素对照组根据血糖水平每晚皮下注射甘精胰岛素注射液,异荭草素处理组按剂量腹腔注射给药。正常对照组和模型对照组接受等量溶剂0.5%羧甲基纤维素钠腹腔注射。给药8周,期间每周监测血糖。8周后应用5%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉小鼠,应用摘除眼球法取血,检测小鼠血清空腹血糖（FBG）水平。取血结束后,迅速取出小鼠腹腔中肝脏。保存肝脏组织,用于随后的比色试剂盒测定肝组织总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、游离脂肪酸（FFA）的含量;比色试剂盒测定T-AOC（总抗氧化能力）、SOD（总超氧化歧化酶）、CAT（过氧化氢酶）,还原型谷胱甘肽（GSH）、MDA（丙二醛）水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测肝脏组织AGEs（晚期糖基化终末产物）;RT-q PCR检测肝脏组织TNF-α、RAGE、NF-κBp65、IL-6（白介素6）m RNA表达水平;Western blotting（蛋白免疫印迹）法检测肝脏组织NF-κBp65、IKKβ、IKBα、p-IKBα、Nrf-2、HO-1、GLUT2蛋白的表达水平。同时取部分肝脏组织固定于4%的多聚甲醛溶液中,进行肝脏组织的HE染色和油红O染色实验。结果:（1）ISO处理后小鼠精神状态、行为动作、饮水进食及皮毛情况较模型对照组明显改善。（2）HE染色结果:正常对照组肝小叶正常,无明显肝细胞脂肪样变及炎性细胞浸润;模型对照组小鼠弥漫性肝细胞脂肪样变且有大量炎性细胞浸润,肝细胞排列紊乱,可见肝细胞坏死;胰岛素对照组及异荭草素低、中、高剂量组,肝小叶结构逐步正常,肝细胞内脂肪空泡逐步缩小,炎性细胞浸润逐渐减少,且ISO（40 mg·kg-1）组对病理变化改善最为明显。（3）油红O染色结果:正常对照组小鼠肝组织未见脂滴沉积;模型对照组小鼠肝组织可见弥漫性红色脂滴形成,数量颇多;胰岛素对照组及异荭草素低、中、高剂量组小鼠脂滴沉积逐渐减少,且异荭草素中(20 mg·kg-1)、高(40 mg·kg-1)剂量组效果较显著。（4）小鼠血糖及肝组织脂质水平变化结果:模型对照组较正常对照组小鼠FBG水平、肝组织脂质TG、TC、FFA明显增加（P＜0.01）;与模型对照组相比较,胰岛素对照组及ISO低、中、高剂量组可不同程度降低小鼠FBG水平、肝组织脂质TG、TC、FFA含量（P＜0.01）,且ISO各剂量组呈剂量依赖。差异均具有统计学意义。（5）小鼠肝脏组织氧化应激水平变化结果:模型对照组较正常对照组小鼠CAT、SOD、GSH、T-AOC水平显著降低（P＜0.01,P＜0.001）,丙二醛（MDA）显著升高（P＜0.01）;与模型对照组相比,胰岛素对照组及ISO低、中、高剂量组可不同程度增加CAT、SOD、GSH、T-AOC的水平（P＜0.01,P＜0.001）,降低MDA的水平（P＜0.01）。异荭草素各剂量组具有明显的剂量依赖性。差异均具有统计学意义。（6）小鼠肝脏组织AGEs水平变化结果:模型对照组较正常对照组小鼠肝组织AGEs明显增加（P＜0.01）;与模型对照组相比,胰岛素对照组及ISO低、中、高剂量组可不同程度降低小鼠肝组织AGEs含量（P＜0.01）,且异荭草素各剂量组呈剂量依赖.差异均具有统计学意义。（7）q PCR结果显示:模型对照组较正常对照组小鼠肝脏组织TNF-α、RAGE、NF-κBp65、IL-6m RNA表达量明显升高（P＜0.01,P＜0.001）。与模型对照组相比,胰岛素对照组及ISO低、中、高剂量组可不同程度降低肝脏组织TNF-α、RAGE、NF-κB p65、IL-6m RNA表达量（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）,且异荭草素各剂量组在降低目的基因TNF-α、RAGE、NF-κB p65m RNA表达作用中呈剂量依赖性。差异均具有统计学意义。（8）Western blotting结果显示:模型对照组较正常对照组小鼠肝组织IKKβ、p-IκBα及NF-κBp65蛋白表达明显增加（P＜0.05,P＜0.01）,而IκBα蛋白表达量无明显增加,Nrf2、HO-1、GLUT2蛋白的表达量均降低（P＜0.05,P＜0.001）;与模型对照组相比,胰岛素对照组及ISO低、中、高剂量组可不同程度降低IKKβ、p-IκBα及NF-κBp65蛋白的表达量（P＜0.05,P＜0.01）,而对IκBα蛋白表达量的影响无差异,且ISO低、中、高剂量组对NF-κB p65蛋白的表达量降低作用呈明显的剂量依赖,ISO低、中、高剂量组Nrf2、HO-1及GLUT2蛋白的表达量呈不同程度增高趋势（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）,且ISO各剂量组对Nrf2及GLUT2蛋白表达量增高作用呈明显的剂量依赖,但对HO-1蛋白表达的增加无剂量依赖。差异均具有统计学意义。结论:1.ISO对T2DM合并MAFLD小鼠的血糖具有明显的降低作用。2.ISO能够改善T2DM合并MAFLD小鼠肝脏脂滴的沉积。3.ISO能够减轻T2DM合并MAFLD小鼠肝脏的炎症反应及氧化应激。4.ISO减轻T2DM合并MAFLD小鼠肝脏的炎症反应机制与抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号途路有关;ISO改善T2DM合并MAFLD小鼠肝脏氧化应激反应机制与激活Nrf-2/HO-1信号通路密切相关;ISO降低血糖的机制与增加肝脏GLUT2蛋白表达有关。