放射性视网膜病变大鼠玻璃体与血清血管内皮生长因子的相关研究

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目的通过放射性60Co照射SD大鼠制作放射性视网膜病变(RadiationRetinopathy,RR)大鼠模型,检测RR大鼠血清、玻璃体中血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)的含量,探讨在RR的发展中,VEGF的作用。方法取45只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组15只,实验组30只(10Gy组15只,30Gy组15只)。0.5%戊巴比妥钠腹腔麻醉后,固定于60Co治疗机治疗床,照射野大小为2×2cm,光野上界位于双眼后眦连线,下界位于双耳后连线。10Gy组:吸收剂量为0.8/Min,连续照射12.5分钟;30Gy组:吸收剂量为0.8/Min,连续照射37.5分钟。分别于3个月,6个月及9个月处死各组大鼠采集标本。过量麻药麻醉后,使用一次性消毒注射器在角膜缘进行穿刺,抽取玻璃体约0.2ML(均为右眼),置入—80℃冰箱中保存。在抽取玻璃体后,剪开大鼠肋骨,暴露胸腔,用一次性注射器插入大鼠左心抽取血液2M1,放置入真空采血试管中进行离心(1000r/min),20分钟后取上清液0.5ml,移入0.5mlEp管中密封,置低温冰箱—80℃保存。在眼球12点钟位置用5/0线定位,分离眼球的肌肉,结膜和巩膜,取出大鼠的右侧眼球,放置于4%甲醛PBS液中固定24小时。剪开角膜去除晶状体,用蒸馏水漂洗数次,将视网膜不间断剪开,保留视乳头,剥离眼球壁内侧的视网膜层,放入清洁的培养皿中,用蒸馏水反复漂洗。取出3%胰蛋白酶液加入培养皿中,放入37℃恒温震荡水浴箱中振荡消化数小时。将消化好的视网膜放入蒸馏水中漂洗数次后放在清洁玻片上,干燥后染色,光镜观察。从冰箱中取出玻璃体及血清标本,置于室温下10Min待测。使用大鼠VEGF ELISA试剂盒进行检测VEGF含量。ELISA测定大鼠血清中VEGF含量:方法同玻璃体测定。试验结果使用均数(X-)和标准差(s)表示,采用SPSS13.0统计软件包对结果进行单因素方差分析(one way-ANOVA)及相关分析。结果①30Gy组大鼠玻璃体中VEGF浓度:正常对照组(77.04±4.36)ng/ml;3个月组(84.66±5.97)ng/ml:6个月组(316.27±9.62)ng/ml:9个月组(663.98±5.93)ng/ml。3个月组、6个月组与9个月组VEGF浓度比正常对照组浓度增高(P<0.01);3个月组与6个月组统计学无差异(P>0.05),9个月组浓度最高;②30Gy组大鼠血清中VEGF浓度:正常对照组(6.78±3.61)ng/ml;3个月组(5.73±2.65)ng/ml;6个月组(7.09±0.85)ng/ml;9个月组(7.16±2.61)ng/ml。与正常对照组比较,9个月组、6个月组、3个月组浓度,统计学上无差异(P>0.05);③10Gy组大鼠玻璃体中VEGF浓度:正常对照组(70.27±1.65)ng/ml;3个月组(72.32±2.16)ng/ml;6个月组(75.06±5.55)ng/ml;9个月组(85.05±4.46)ng/ml。3个月组、6个月组与9个月组VEGF浓度比正常对照组浓度增高(P<0.01):9个月组浓度最高,3个月组与6个月组比较统计学上无差异(P>0.05)。④10Gy组大鼠血清VEGF浓度:正常对照组(5.98±3.64)ng/ml;3个月组(4.85±3.16)ng/ml;6个月组(6.29±2.40)ng/ml;9个月组(5.11±2.67)ng/ml。与正常对照组比较,9个月组、6个月、3个月组比较在统计学上无差异(P>0.05)。
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