本论文由两部分构成，一是利用PCR技术克隆出猪瘟病毒C-株和GXYL野毒株的p80基因，二是利用大肠杆菌原核表达系统，通过基因重组技术高效表达出p80基因的NTPase／KNA helicase功能区。主要实验和结果如下： 1．以C-株兔脾组织毒和广西野毒GXYL株的脾毒为材料，参照已发表的猪瘟病毒Alfort株和Brescia株的全基因纽序列，设计2对引物，采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)方法扩增出猪瘟病毒C-株和GXYL株的p80基因，连接于克隆载体pGEM-T Easy后，转化感受态细胞DH5a，经37℃过夜培养，挑取阳性克隆，将PCR和酶切鉴定正确的重组质粒测序，比较C-株、GXYL株、Alfort株和Brescia株相应核苷酸序列和氨基酸序列同源性，其核苷酸同源性最低为87.46％，最高为99.04％；氨基酸同源性最低为94.27％，最高为98.09％，进一步证实了猪瘟病毒p80基因的高度保守性，而且说明变异的核苷酸大多为无意义突变类型，这些变异不足以影响p80蛋白的根本特性。 2．另设计一对5′端分别带有BamH Ⅰ和Xho Ⅰ识别序列的表达引物，从以上实验构建的重组质粒pGEM-GXNS3和pGEM-CNS3中分别扩增出GXYL株和C-株p80基因的NTPase／RNA heicase功能区，分别与克隆载体pGEM-TEasy连接并转化，阳性克隆扩增后提取重组质粒pGEM、sGXNSE和pGEM-sCNS3。BamH Ⅰ和Xho Ⅰ分别双酶切pGEM-sGXNS3和pGEM-sCNS3以及表达载体pET-30a(+)，以产生粘性木端。纯化回收后，将pGEM-sGXNS3和pGEM-sCNS3与pET-30a(+)连接，并分别转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组质粒pET-sGXNS3和pET-sCNS3。PCR、酶切和序列分析鉴定目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确，1.0mmol／L IPTG诱导得到分子量为26kd的目的蛋白，Western blot检测表明，表达的目的蛋白能被猪瘟病毒阳性血清所识别，从而为建立用重组p80蛋白作为猪瘟弱毒苗免疫猪和基因工程苗免疫猪的鉴别诊断抗原的ELISA方法及其它血清学方法奠定了基础。