【摘 要】
：
目的:1.分离、培养并鉴定从小鼠腹股沟脂肪中提取的脂肪间充质干细胞（Adiposederived stem cells,ADSCs）。2.观察不同浓度辛伐他汀对小鼠ADSCs体外培养中成骨分化的影响,筛选离体实验中促小鼠ADSCs成骨分化的辛伐他汀浓度。3.探讨辛伐他汀是否可以通过Hedgehog信号通路促进小鼠ADSCs成骨分化。研究方法:1.于无菌条件下取小鼠腹沟股区脂肪组织,获取ADSCs贴
论文部分内容阅读
目的:1.分离、培养并鉴定从小鼠腹股沟脂肪中提取的脂肪间充质干细胞（Adiposederived stem cells,ADSCs）。2.观察不同浓度辛伐他汀对小鼠ADSCs体外培养中成骨分化的影响,筛选离体实验中促小鼠ADSCs成骨分化的辛伐他汀浓度。3.探讨辛伐他汀是否可以通过Hedgehog信号通路促进小鼠ADSCs成骨分化。研究方法:1.于无菌条件下取小鼠腹沟股区脂肪组织,获取ADSCs贴壁培养,辛伐他汀诱导第三代（P3代）ADSCs成骨分化和成脂分化,茜素红染色和油红O染色对小鼠ADSCs成骨、成脂分化结果分别进行鉴定,以确定细胞的多项分化潜能;流式细胞技术检测P3代ADSCs的CD29、CD45、CD90标志物的阳性率。2.体外培养中,分别以浓度为0、0.01、0.05、0.1、0.5、1μmol/L的辛伐他汀干预P3代小鼠ADSCs成骨诱导培养,利用CCK-8检测24h、72h、120h细胞增殖活力,于培养第7天检测碱性磷酸酶活性,分析不同浓度辛伐他汀对细胞增殖活力及碱性磷酸酶的影响,选择合适的辛伐他汀浓度以进行下一步实验。3.选取生长状态好的P3代ADSC细胞并随机分为四组,分别为对照组（Control group,Ctrl）、辛伐他汀组（Simvastatin group,SIM）、环杷明组（Cyclopamine group,Cpn）、共处理组（Co-trentment group）;ALP检测试剂盒检测各组碱性磷酸酶活性,茜素红染色后检测细胞成骨分化,RT-qPCR分析ADSC成骨分化相关基因表达情况,Western blot检测ADSCs成骨分化相关基因蛋白的表达。结果:1.CD29、CD90在P3代ADSCs中表达率较高,CD45在P3代ADSCs中表达率较低;辛伐他汀诱导的成脂分化行油红O染色可见橘红色脂滴;辛伐他汀诱导的成骨分化细胞行茜素红染色可见砖红色钙结节沉积。2.CCK-8检测细胞增殖结果显示在第24h和72h各组细胞的增殖率较空白对照组无显著差异（P＞0.05）,120h时1μmol/L浓度组的辛伐他汀培养液相对于空白对照组的增殖率降低（P＜0.05）,说明1u M浓度的辛伐他汀培养液在细胞培养的第120h时对细胞增殖具有一定抑制作用。将P3代小鼠ADSCs用含有不同浓度SIM的成骨诱导培养基培养,成骨诱导结果显示0.5 umol/L组明显高于其它各组的ALP活性（P＜0.05）,0umol/L组ALP活性低于1umol/L,但无统计学意义（P＞0.05）。3.ALP染色及活性检测实验发现各组ADSC的ALP活性大小依次为SIM组、共处理组、对照组、Cpn组,茜素红染色及钙定量检测实验各组ADSC的钙含量由大到小分别为为SIM组、共处理组、对照组、Cpn组;PCR及Western blot实验结果显示各组小鼠ADSC的ALP、COL1A1、OCN、RUNX2的基因及相关蛋白表达情况发现SIM组较其他组基因及相关蛋白表达情况高（P＜0.01）,共处理组高于对照组,Cpn组低于对照组。结论:1.脂肪组织中提取的ADSCs具有成骨等多向分化能力,且纯度高,可以作为成骨分化组织工程的的种子细胞。2.低浓度辛伐他汀对小鼠ADSCs增殖影响较小,高浓度辛伐他汀抑制ADSCs的增殖,本次实验研究结果表明0.5μmol/L的辛伐他汀促进小鼠ADSCs成骨分化作用较好。3.辛伐他汀可部分通过Hedgehog信号通路促进小鼠ADSCs成骨分化,该作用可被Hedgehog信号通路特异性阻断剂环杷明抑制。
其他文献
研究背景及目的:人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者启动治疗时采用的抗逆转录病毒疗法（ART）通常由2种核苷类逆转录酶抑制剂联合第3种核心药物组成,后者可以为非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）或增强型蛋白酶抑制剂（PI）或整合酶抑制剂（INI）。多拉韦林（DOR）是一种新型NNRTI,DOR+替诺福韦（TDF）+拉米夫定（3TC）/恩曲他滨（FTC）在初治HIV-1成人感染者中通过2项3期随机对照试
目的:探讨醋酸甲羟孕酮、曼月乐、GnRH-a联合曼月乐治疗子宫内膜非典型增生的临床效果、妊娠情况及对生活质量的影响,为子宫内膜非典型增生保留生育功能治疗提供临床证据。方法:收集2014.1～2019.12在临沂市中心医院经宫腔镜治疗后病理确诊为子宫内膜非典型增生且强烈要求保留生育功能的114位患者作为研究对象进行回顾性分析,根据患者治疗方式不同分为三组:A组:38例,连续口服醋酸甲羟孕酮,250m
目的:长期过量饮酒对人体肝脏、大脑、睾丸等组织器官可造成损害。本研究拟建立长期过量饮酒对雄性大鼠生殖损伤的动物模型,并观察具有较强抗氧化活性的叶黄素补充对过量酒精致雄性大鼠生殖损伤的影响,为进一步揭示酒精危害及合理膳食营养补充降低其损伤提供参考依据。方法:将60只健康雄性Wistar大鼠,适应性喂养2周后随机分为6个组（10只/组）:正常对照组（C）、叶黄素组（L）、酒精模型组（M）、酒精+低剂量
目的以计算机断层扫描图像为基础建立额窦三维模型,选取观测指标,对额窦的三维形态特征进行分类,同时结合指标数字编码进行编码研究,为利用额窦进行法医学个体识别提供理论依据。方法收集青岛大学附属医院放射科2015年～2020年间476例头颅CT平扫（轴位）图像资料,年龄范围21～70岁,其中男性240例,女性236例。使用Mimics软件进行三维重建获得额窦三维模型,测量其长度、宽度、高度、左、右侧额窦
目的:探讨隐形前导矫治器（Invisalign Mandibular Advancement,MA）对青少年骨性II类下颌后缩畸形的临床应用效果,以期为临床此类患者的矫治提供参考及依据。材料与方法:选取青岛大学附属医院2017年12月至2021年6月使用隐适美MA矫治器完成治疗过程的骨性II类下颌后缩青少年患者共30例,其中包括男性15例,女性15例,初诊年龄10-13岁,平均年龄11.6±0.9
目的:七氟烷作为临床常用的吸入麻醉药物,已被证实可通过抑制细胞凋亡或减轻自噬流损伤来发挥心肌保护作用,而细胞程序性坏死在其中的影响仍有待进一步明确。糖尿病因素不仅可增加心肌缺血再灌注损伤,还取消七氟烷对心肌保护作用,其中的机制尚未阐明。本论文通过比较在有无糖尿病因素下,七氟烷对心肌损伤程度的影响及对程序性坏死相关蛋白表达的作用,以探讨七氟烷后处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用与RIPK3介导
目的:通过比较直接前入路与外侧入路全髋关节置换术后不同时间段的步态参数,分析哪种手术入路在术后步态参数方面更利于术后步态功能恢复。方法:纳入于2019.10-2021.01期间计划行单侧全髋关节置换术的86例患者,随机分为直接前入路（Direct anterior approach,DAA）组和外侧入路（Lateral approach,LA）组,DAA组与LA组分别包括44例和42例患者。术后两
目的:通过观察家庭参与式护理（Family integrated care,FIC）对晚期早产儿的临床效果及父母心理的影响,探讨在新生儿重症监护病房中对晚期早产儿实施家庭参与式护理的必要性。方法:前瞻性研究,选取2017年1月～2018年1月日照市妇幼保健院新生儿重症监护病房（Neonatal Intensive Care Unit,NICU）住院、符合纳入标准的胎龄340/7周至366/7周晚期
目的:新生儿缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）与神经细胞中炎症小体的激活及其介导的细胞焦亡相关,亚低温联合氙气治疗可能具有更好的神经保护作用。本研究建立HIBD新生大鼠模型,通过检测NLRP-3炎症小体及其介导的细胞焦亡相关指标的表达情况,探讨细胞焦亡与HIBD的相关性,探究亚低温联合氙气能否通过调控神经细胞焦亡,减轻脑损伤程度,改善神经系统预
背景:由于糖皮质激素在众多风湿免疫性疾病中的广泛应用,Fukushima等研究显示,激素性股骨头坏死已居非创伤性股骨头坏死的首位。脐带间充质干细胞来源于脐带,具有纯度高、增殖活性强以及多向分化和分泌细胞因子能力优异等特点。由于其独特的能力,在股骨头坏死方面展现了极大的临床应用前景。已有数据显示,干细胞在早期股骨头坏死患者的临床应用中取得了良好的安全性和临床反应,主要临床观察指标包括髋关节评分和影像