论文部分内容阅读
目的:研究Stat3基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系,探讨Stat3在胃癌发生发展中所起的重要作用。探讨转染Stat3-siRNA表达载体阻断人胃癌细胞系SGC7901的Stat3信号传导通路对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。
方法:首先以β-actin基因为参照,应用实时定量PCR(Real-time PCR)技术,检测40例胃癌组织及癌旁正常组织中的Star3基因的表达。然后利用RNAi技术,构建Stat3-siRNA表达载体,稳定转染胃癌细胞系SGC7901,利用Real-time PCR、Western-blot、MTT、TUNEL、流式细胞技术等方法分别检测Stat3基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖和凋亡的变化情况。最后利用基因芯片技术检测胃癌细胞系SGC7901转染前后凋亡与细胞周期相关基因的表达差异。
结果:Stat3基因在癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,差异具有显著性(P<0.05);同时Stat3基因在胃癌组织中的表达量与患者TNM分期、淋巴结转移、远处转移情况具有相关性,而与患者年龄、肿瘤大小及分化程度均无显著相关性。成功构建Stat3-siRNA表达载体,经测序验证无误。Western-blot及Real-time PCR结果显示Stat3基因的表达水平均下降,其中以SGC7901-siRNA3干涉效果最为明显,差异具有显著性(P<0.05),表明此RNA干涉实验获得了良好的基因表达沉默的效果。MTT法结果显示:稳定转染SGC7901细胞后,细胞的增殖能力明显下降,与Stat3-control稳定转染SGC7901细胞以及SGC7901细胞本身相比差别显著(P<0.05)。TUNEL、流式细胞技术显示:Stat3-siRNA3实验组较对照组出现了明显的细胞凋亡(P<0.05),在G1期前出现的亚二倍峰即为凋亡峰。基因芯片技术检测发现,胃癌细胞系SGC7901稳定转染Stat3-siRNA表达载体前后有大量凋亡与细胞周期相关基因的表达发生变化,其中表达上调超过两倍的有23个基因,下调超过两倍的有29个基因。
结论:1、Stat3基因在胃癌组织中的表达显著增高,并且与胃癌的浸润、转移密切相关,因此Stat3基因可以作为胃癌早期发现,判断转移的重要依据。2、Stat3基因的RNAi重组体可以有效的抑制Stat3基因的表达。3、RNA干扰技术沉默Sat3基因能够抑制胃癌细胞的生长,促进其凋亡。4、Stat3基因表达的下调能引起大量细胞凋亡和细胞周期相关基因的表达变化。