哥斯达黎加链霉菌A-m1对小麦和番茄的防病促生作用

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实验室前期研究表明哥斯达黎加链霉菌菌株A-m1对小麦赤霉病菌等多种植物病原真菌具有良好拮抗作用,本论文以菌株A-m1为研究对象,测定了该菌株抑菌活性的稳定性,结合全基因组测序解析了其促生防病作用的遗传基础,并分析了其液态、固态发酵产物对小麦和番茄促生防病的效果。主要研究结果如下:(1)菌株A-m1发酵液转接8次抑菌活性不降低,发酵液可耐受70℃高温、p H 3~10、蛋白酶K的处理;不耐受可见光和紫外线、不耐储藏,在常温下储藏30 d,其抑菌活性下降了50.15%。菌株A-m1发酵液经乙酸乙酯抽提纯化,粗提物可耐100℃高温、蛋白酶K的处理、紫外线照射120 min;不耐受可见光,储藏稳定性提高,在常温下储藏30 d,其抑菌活性与对照相比仅下降15.7%。(2)全基因组测序结果表明,菌株A-m1基因组包含有促进植物生长相关的生长素、细胞分裂素、铁载体、ACC脱氨酶、植酸酶、磷酸酶、固氮酶基因;含有编码一些防病相关的基因,如亚精胺合成酶、脂肪酸合成酶、脂多糖和生物碱类等,同时还能编码一些抗生素和抑菌作用的酶,如四环素、链霉素、纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶、酪蛋白酶和几丁质酶等。生化分析进一步证明了菌株A-m1可产生促生作用的激素IAA,螯合Fe3+的噬铁素,抑菌作用相关的纤维素酶、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶和酪蛋白酶。(3)菌株A-m1发酵液对小麦进行灌根,对小麦幼苗表现出显著的促生作用,并能诱导相关防御酶活性提高。在发酵液较低浓度时其促生作用更明显,当发酵液稀释400倍时,小麦的根长、鲜重、干重、根干重和SPAD值与对照相比,分别增加了15.7%、7.4%、44.2%、27.7%和10.9%,CAT、POD和PPO酶活分别增加了84.9%、112.2%、41.4%,丙二醛含量降低了78.1%。菌株A-m1发酵液能够显著抑制小麦赤霉病菌大型分生孢子的萌发,抑制其菌丝的生长,运用单小花滴注法接种测定菌株A-m1发酵液对小麦赤霉病的防效,结果表明菌株A-m1发酵液能够显著降低小麦赤霉病病情指数,防效为27.65%。(4)尝试制备了菌株A-m1的两种固体发酵菌肥,分别按10 g·kg-1、20g·kg-1、40 g·kg-1的比例添加到番茄栽培基质中,幼苗期结果表明两种固体菌肥均能显著促进番茄的生长,2号固体菌肥的促生效果更好,促生效果与其添加量正相关。当2号固体菌肥的添加量为40 g·kg-1时,与对照相比,番茄的株高、根长、茎粗、鲜重、干重和SPAD值显著提高,分别增加了71.4%、46.7%、17.9%、166.2%、212.7%和11.2%。叶片内PAL、CAT、POD、SOD和PPO酶活性显著增加了211.2%、169.9%、148.7%、218.2%和39.5%,丙二醛含量降低了79.8%。苗期施用过两种菌肥的番茄移栽后,植株继续表现出生长加速和对灰霉病的抗性。当接种灰霉病菌后,两种固体菌肥添加量为40 g·kg-1时,施用1号固体菌肥的番茄叶片中PAL、CAT和POD酶活峰值与对照相比,显著提高了240.4%、176.1%和466.7%,丙二醛含量降低了44.1%;施用2号固体菌肥的番茄叶片中PAL、CAT和POD酶活峰值与对照相比,显著提高了294.2%、320.8%和216.7%,丙二醛含量降低了78.9%;对番茄灰霉病的防效分别为73.53%和68.35%,防效优于化学药剂腐霉·福美双。结果表明,菌株A-m1对番茄具有显著的促生作用,可诱导番茄植株系统抗性,提高番茄叶片内相关的防御酶活性,有效地预防番茄灰霉病的发生和发展。
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