了解环境温度对种公兔的精液质量的影响和原因,对于缓解家兔的“夏季不育症”具有重要意义。研究以新西兰白兔种公兔为试验动物,检测了 5月和8月份种兔舍的THI值、精液品质和精浆生化指标,运用转录组学和代谢组学等技术手段,探究种公兔响应热应激刺激的调控网络,为研究缓解种公兔适应热应激技术提供理论参考,助力养兔业持续健康发展。主要的试验结果如下:1.选择20只种公兔,用温湿度计每天记录三次（8:00、14:00、20:00）环境温度和相对湿度,采集公兔在5月份和8月份的精液,分析两组之间的精液品质差异。结果显示,5月份兔舍平均温度为22.04℃,平均湿度为61.82%,8月份兔舍平均温度为30.15℃,平均湿度为78.62%。5月份兔舍的THI值为20.94;8月份兔舍的THI值为29.10,定义5月份公兔为未热应激组,8月份公兔为热应激组。热应激组与未热应激组相比,热应激组精子活力、精子密度、精液pH极显著降低（P＜0.01）,采精量显著降低（P＜0.05）,畸形率显著升高（P＜0.05）。热应激组的A级精子数极显著降低（P＜0.01）,B级和C级精子数极显著升高（P＜0.01）,D级精子数两组之间没有显著性差异（P=0.112）。热应激组的TSO、TMS、TFSF三项指标都极显著降低（P＜0.01）。热应激组精浆中的热应激蛋白70（HSP70）、酸性磷酸酶（ACP）极显著升高（P＜0.01）;精浆睾酮（T）、α-葡萄糖苷酶（α-Glu）、果糖（Fructose）极显著降低（P＜0.01）;金属离子中Mg2+、Na+、K+浓度极显著降低（P＜0.01）;碱性磷酸酶（P=0.148）、乳酸脱氢同工酶（P=0.775）两组之间没有显著性差异。结果显示热应激会影响公兔的精液品质,导致公兔精液质量下降。2.采用UPLC-MS/MS技术对热应激组和未热应激组精浆样本进行分析,共识别出346个代谢物,以VIP＞1.0,FC＞1.5或FC＜0.667且P＜0.05为阈值,共匹配到71个差异代谢物,包括硬脂酸、甜菜碱、花生四烯酸、L-苹果酸、吲哚等。差异代谢物KEGG分析发现,差异代谢物富集的代谢途径有能量代谢和氨基酸代谢等,包括烟酸盐和烟酰胺代谢、柠檬酸循环、色氨酸代谢等。3.采用RNA-Seq技术对热应激组和未热应激组的精子进行分析,结果显示热应激组和未热应激组共存在1676个差异基因,其中上调基因894个,下调基因782个。差异表达基因GO和KEGG分析结果显示,GO富集于代谢过程、防御反应、细胞对细胞因子刺激的反应、有机氮化合物代谢过程、生物刺激反应等,包括SIRT1、NT5C3A、MSMO1、PHGDH等。KEGG分析主要富集的有细胞因子-细胞因子受体相互作用、叶酸生物合成、柠檬酸循环等。对差异基因和差异代谢物联合分析,共得到14个代谢物和27个基因,其中代谢物包括棕榈酸、花生四烯酸、L-苹果酸等,基因包括ACSBG1、PPT1、THEM5、ME2、MDH2、ME1等。KEGG分析富集的代谢过程包括乙醛酸和二羧酸代谢、花生四烯酸代谢、柠檬酸循环、丙酮酸代谢等。研究结果为深入了解热应激对种公兔精液质量下降的机理提供参考。